弓形虫主要表面抗原SAG1和信号转导蛋白14-3-3的DNA疫苗免疫小鼠诱导的保护性研究

发布时间：2017-10-31 07:17

  本文关键词：弓形虫主要表面抗原SAG1和信号转导蛋白14-3-3的DNA疫苗免疫小鼠诱导的保护性研究

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【摘要】：刚地弓形虫是一种机会性致病原虫,可引起人畜共患的弓形虫病。在一些国家,尤其是热带国家,弓形虫病(Toxoplasmosis)一直是重要的公共卫生问题,给人类健康和畜牧业生产带来了巨大的经济损失。全球感染人数大约在10-20亿,人感染弓形虫后通常表现为隐性感染,普通隐性感染也可引起强迫症,精神分裂症,抑郁症,阿尔茨海默病,帕金森氏病等。弓形虫DNA疫苗可有效预防和控制弓形虫病的传播,有利于人类健康和畜牧业生产。实验研究表明,弓形虫14-3-3蛋白具有免疫原性和抗原性,是一个有潜力的疫苗候选抗原。在本次研究中,我们评价了弓形虫SAG1和14-3-3的单基因和复合基因疫苗在小鼠体内引起的免疫效应。 目的：在本次研究中我们构建了单基因和复合基因疫苗,分别接种BALB/c小鼠,观察免疫效应。研究的主要目的是评估弓形虫14-3-3蛋白作为疫苗候选抗原的可能性、验证弓形虫SAG1蛋白在小鼠体内引起的免疫效应以及评价单基因和复合基因疫苗的免疫效应的差异。 方法：实验过程中,BALB/c小鼠被随机分成5组,包括三组实验组(pSAG1、p14-3-3和pSAG1/14-3-3):和两组对照组(PBS和pBudCE4.1).所有小鼠经肌肉注射共免疫接种质粒三次。小鼠血清抗体和细胞因子的水平使用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行测定。末次免疫后两周,小鼠经腹腔注射含弓形虫速殖子的悬液(1×104/只)。每天观察并记录小鼠的生存时间。 结果：与对照组相比,所有实验组小鼠(pSAG1,p14-3-3和pSAG1/14-3-3)体内产生的免疫反应类型主要以Thl型为主,产生较高水平的IgG2a和IFN-y,并且随着免疫次数的增加水平逐渐升高(P0.05)。在实验组和对照组中,IL-4和IL-10水平较低,且两组之间没有差异(P0.05)。在弓形虫感染攻击实验中可以观察到实验组小鼠的生存时间显著延长,而对照组小鼠在7天内全部死亡。在弓形虫速殖子攻击感染后的第18天,所有小鼠均死亡,表明本次实验构建的DNA疫苗在小鼠体内只能提供部分保护,不能完全抵抗弓形虫急性感染。与单基因疫苗(pSAG1和p14-3-3)相比,复合基因疫苗(pSAG1/14-3-3)在小鼠体内能产生更强的体液免疫和细胞免疫反应,小鼠的生存时间显著延长(P0.05)。 结论：弓形虫14-3-3蛋白在小鼠体内能诱导有效的免疫反应,是一个好的疫苗候选抗原。同时,研究证实弓形虫SAG1蛋白具有较好的免疫原性,是构建复合基因疫苗的首选抗原。从我们的研究结果也可以看出复合基因疫苗能产生更强的免疫效应和延长小鼠的生存时间,优于单基因疫苗。
【关键词】：刚地弓形虫 SAG1 14-3-3 DNA疫苗 免疫 BALB/c小鼠
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R382.5;R392
【目录】：

• CONTENTS5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符号说明10-12
• 前言12-15
• 第一部分 弓形虫SAG1和14-3-3的DNA疫苗的构建及鉴定15-53
• 一、材料15-20
• 二、方法20-42
• 三、结果42-51
• 四、讨论51-53
• 第二部分 弓形虫SAG1和14-3-3的DNA疫苗对小鼠的免疫效应研究53-65
• 一、材料53-54
• 二、方法54-58
• 三、结果58-62
• 四、讨论62-65
• 附图65-67
• 参考文献67-71
• 致谢71-72
• 攻读学位期间发表的论著72-73
• 学位论文评阅及答辩情况表73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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2 吴春风,李淑红;弓形虫病免疫学研究现状[J];国外医学(寄生虫病分册);2004年02期

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本文编号：1121341