促红细胞生成素对O-2A祖细胞生物学特性的影响

发布时间：2017-10-31 09:03

  本文关键词：促红细胞生成素对O-2A祖细胞生物学特性的影响

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【摘要】：O-2A (oligodendrocytes-type2astrocytes)祖细胞为双潜能细胞,可分化成少突胶质细胞(oligodendrocytes, OLs)和2型星形胶质细胞(type2astrocytes, T2As)。分离纯化O-2A祖细胞,有助于深入了解其增殖与分化的细胞生物学特性,也可用于细胞移植治疗脱髓鞘疾病以及中枢神经系统疾病。目前主要通过恒温振荡与差速贴壁法分离纯化O-2A祖细胞,但在收集过程中,无法分离那些混合存在于1型星形胶质细胞(typel astrocytes, T1As)之间的O-2A祖细胞,随着TIAs的生长和消化传代而渐渐消失。本实验采用促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)处理混存于T1As之间的O-2A祖细胞,检测分析其生物学特性。 目的：研究EPO对混存于TIAs之间的O-2A祖细胞的增殖作用,探寻有效利用这些O-2A祖细胞的方法；观察EPO处理的O-2A祖细胞在增殖与分化等生物学特性的变化,为其是否能作为细胞移植治疗神经系统相关疾病的细胞来源提供依据。 方法：(1)取新生大鼠大脑皮层进行原代混合胶质细胞培养,用恒温振荡与差速贴壁的方法分离和纯化O-2A祖细胞。(2)对纯化收集O-2A祖细胞后混存于T1As之间的O-2A祖细胞,用含EPO (10U/ml)的DMEM/F12-10%NBCS培养,观察O-2A祖细胞的生长状态。(3)分别用三种条件培养基[①T1As条件培养基(A1CM);②EPO处理的TIAs条件培养基(EA1CM);③EPO处理上述TIAs之间有O-2A祖细胞混存的条件培养基(EACM)]培养O-2A祖细胞48h,MTT法检测各种条件培养基对O-2A祖细胞增殖活性的影响；将O-2A祖细胞加入未长满的TIAs中,探讨对O-2A祖细胞增殖的影响。(4)纯化经EPO处理后大量增殖的O-2A祖细胞,将其命名为EO-2A(erythropoietin-treated O-2A)祖细胞,免疫荧光染色法检测EO-2A祖细胞及其分化细胞的抗原表型；根据EO-2A祖细胞在增殖与分化培养基下的生长情况,绘制细胞生长曲线并统计分析所分化细胞的百分数。 结果：(1)以EPO处理3-5天后,混存于TIAs之间的O-2A祖细胞大量增殖,细胞折光性强。(2)A1CM对O-2A祖细胞具有增殖作用，，EPO、EA1CM和EACM对O-2A祖细胞增殖无影响；经EPO处理72h后，与T1As接触的O-2A祖细胞大量增殖不分化，而与T1As不接触的O-2A祖细胞则分化成T2As。(3)与O-2A祖细胞相比，EO-2A祖细胞开始增殖与分化的时间延迟，分化成T2As的比率高，且细胞的突起更长；免疫荧光染色结果显示EO-2A祖细胞呈NG2和A2B5双阳性，其分化成熟的T2As呈GFAP和A2B5双阳性，其分化成熟的OLs呈GalC和MBP双阳性。 结论：上述结果表明，EPO能够使混存于T1As之间的O-2A祖细胞大量增殖，且这种增殖作用依赖于T1As与O-2A祖细胞的接触。与正常培养的O-2A祖细胞相比，EO-2A祖细胞的细胞突起更长，且更易于诱导分化为T2As。为其作为细胞移植治疗神经系统相关疾病的细胞来源提供依据。
【关键词】：O-2A祖细胞 促红细胞生成素 星形胶质细胞 少突胶质细胞
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R338
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 参考文献10-13
• 第一部分 促红细胞生成素对 O-2A 祖细胞增殖的影响13-30
• 材料和方法13-19
• 结果19-24
• 讨论24-26
• 参考文献26-30
• 第二部分 EO-2A、O-2A 祖细胞的生物学特性的比较30-40
• 材料和方法30-32
• 结果32-35
• 讨论35-37
• 参考文献37-40
• 结论40-41
• 综述41-54
• 参考文献45-54
• 缩略词表54-55
• 攻读学位期间发表和待发表论文55-56
• 致谢56-57

【参考文献】

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 王凌云;牛建钦;汪云;燕增奎;肖岚;;星形胶质细胞间缝隙连接调节少突胶质细胞增殖分化的作用研究[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

本文编号：1121648