EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系的构建及其在小鼠肝癌模型中的应用

发布时间：2017-10-31 12:03

  本文关键词：EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系的构建及其在小鼠肝癌模型中的应用

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【摘要】：目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白EGFP及荧光素酶luciferase的真核表达载体p CMVLuciferase-IRES2-EGFP,对肝癌细胞系Hepa1-6转染后进行稳定筛选,并将表达该载体的细胞系应用于小鼠原位肝癌模型构建,以对小鼠肝癌细胞进行稳定标记与活体示踪。方法:对p GL3-Basic质粒进行Xba I酶切、Klenow片段补平黏端、Xho I酶切获得luciferase小片段,与Xho I/Sma I酶切p IRES2-EGFP质粒获得的载体大片段连接,获得重组质粒p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP。酶切鉴定、测序比对确认序列完全正确后,以重组载体转染Hepa1-6细胞进行稳定筛选,以荧光显微镜观察EGFP表达,报告基因实验与LuminaⅡ成像系统检测荧光素酶活性。确认该细胞系中的质粒得到表达后,以该细胞系进行C57BL/6小鼠肝脏原位接种构建肝癌模型,以LuminaⅡ成像系统连续活体监测肝癌的生长,取离体的肝癌组织制备石蜡切片(HE染色)和冰冻切片(免疫荧光染色)分别观察离体肿瘤组织病理学特征及其中肝癌细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功构建表达p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP载体的Hepa1-6细胞系(EGFP-Luc-Hepa1-6),并以该细胞系成功构建C57BL/6小鼠原位肝癌模型,实现小鼠肝癌细胞的活体示踪与体外标记。结论:成功构建EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系,且以此细胞系构建的小鼠原位肝癌模型可以同时实现小鼠肝癌生长的连续活体监测与离体组织检测。
【作者单位】： 第四军医大学西京医院;第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室肿瘤生物学国家重点实验室;
【关键词】： 肝癌 Hepa- EGFP Luciferase 小鼠 载体
【基金】：国家自然科学基金重大研究计划培育项目(91029731),国家自然科学基金青年科学基金(81100307),国家自然科学基金青年科学基金(81401940) 肿瘤生物学国家重点实验室(第四军医大学)开放基金(Cbskl201408)资助项目
【分类号】：R735.7;R-332
【正文快照】： 肝癌的动物模型是研究肝癌的发病机制、药物的疗效评价、开发新的治疗方法的重要工具,已广泛的应用于肝癌的基础研究中。其构建方法可以分为肿瘤移植、基因修饰、病毒感染、化学试剂诱导等[1]。Schneider等[2]对2周龄小鼠进行腹腔注射二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN),42

【共引文献】

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本文编号：1122245