p53在MVC感染致靶细胞WRD凋亡中的分子机制研究

发布时间：2017-10-31 13:04

  本文关键词：p53在MVC感染致靶细胞WRD凋亡中的分子机制研究

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【摘要】：目的MVC（Minute Virus of canine）是博卡病毒的一种，课题组早期研究发现MVC感染其嗜性细胞WRD(Walter Reed Dog)后会引发DNA损伤、细胞凋亡以及细胞周期阻滞，但是到目前为止，，其所致凋亡的具体途径并不完全清楚。因此，本文通过研究MVC感染WRD后p53及其下游各个靶基因表达变化、p53抑制剂干预作用，以此探究p53基因在MVC感染致靶细胞凋亡中的分子机制。 方法首先观察博卡病毒MVC感染WRD细胞后细胞在形态学上的改变；通过TUNEL法分析MVC感染WRD细胞所诱导的细胞凋亡；通过检测细胞活力及流式细胞仪分析，观察p53抑制剂在病毒感染中细胞活力及靶细胞凋亡所起到的作用；在确认p53在凋亡中的作用后，通过PCR以及Real-time PCR来分析p53在mRNA水平的变化；通过蛋白免疫印迹法检测P53蛋白水平表达变化，同时分析其磷酸化水平以及下游的P21、FAS-L表达水平的变化。 结果1.通过TUNEL法观察到MVC感染的细胞中有明显的细胞凋亡小体形成；2. Real-time PCR结果显示，p53mRNA表达量在MVC感染后12h明显上升，与此同时，P53蛋白免疫印迹结果与PCR结果一致；3. P53-Ser15和P21的表达量均随着感染时间的增加呈现一定的增强，FAS-L的表达量并没有出现明显的变化。4.细胞活力检测结果显示：p53抑制剂干预组的细胞活力高于未干预组；5.流式细胞分析显示p53抑制剂降低了MVC诱导的靶细胞凋亡程度。 结论MVC感染WRD细胞致其细胞病变后，p53在mRNA及蛋白表达水平均增高，P53磷酸化水平增强。p53表达升高促进下游基因p21的表达。MVC感染并未引起FAS-L的表达变化，提示死亡受体途径可能未介入MVC致靶细胞凋亡过程。P53抑制剂能够降低MVC感染致靶细胞WRD的细胞凋亡程度。总之，p53参与了MVC感染致靶细胞WRD的凋亡过程。
【关键词】：p53 细胞凋亡 博卡病毒MVC 流式细胞术
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 缩略语索引7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-24
• 结果24-36
• 讨论36-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 文献综述46-63
• 综述参考文献57-63
• 致谢63-64
• 攻读硕士期间发表的学术论文64

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本文编号：1122443