肺炎链球菌重组蛋白LytA体外抗菌效应探讨

发布时间：2017-11-03 09:16

  本文关键词：肺炎链球菌重组蛋白LytA体外抗菌效应探讨

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【摘要】：目的构建肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌表达系统中表达,获取LytA重组蛋白(rLytA),初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中的肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌ATCC49619标准株基因组中扩增lytA基因序列,分别构建克隆载体PGM-T/lytA和表达载体pET32a(+)/lytA,将pET32a(+)/lytA转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后用透析袋等电点洗脱技术纯化目的蛋白rLytA;采用微量肉汤稀释法测定rLytA和青霉素G对肺炎链球菌及其青霉素G耐药株的最低抑菌浓度(MIC),动态测定肺炎链球菌及其耐药株对rLytA和青霉素G的药物敏感性,评价rLytA的体外抗菌活性。结果成功构建了原核表达载体pET32a(+)/lytA,获得的rLytA对肺炎链球菌标准株和青霉素G耐药株的MIC分别为8μg/ml和16μg/ml;以rLytA对标准株及耐药株MIC的3倍浓度,分别作用于标准株及耐药株,与未加药物的对照组相比,rLytA作用于标准株3h后细菌数显著减少(P0.05),且效果持续至7h(P0.05);对青霉素G耐药株作用3h时显示具有抑菌效果(P0.01),且抑菌作用持续至7h(P0.01)。结论一定浓度的rLytA对肺炎链球菌标准株和耐药株均显示出抑菌作用,且持续时间长,具有作为抗菌药物的可能性。
【作者单位】： 大连医科大学临床免疫与微生物教研室;大连市第五人民医院内科;
【关键词】： 肺炎链球菌 自溶素 抗菌药物 基因表达
【基金】：辽宁省科技厅自然科技基金项目(No.201202053)
【分类号】：R378.12
【正文快照】： ***链球菌(Streptococcus pneumoniae)是定植人鼻咽部的正常菌群,但在某些因素的刺激影响下也会成为致病菌,是社区获得性肺炎的主要病原体[1],还可导致腹膜炎、中耳炎和脑膜炎等多种疾病[2-3]。目前肺***炎链球菌耐药普遍性和多重性趋势逐渐升高[4-5],开发新的药物治疗肺炎链

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