miR-106a致去卵巢小鼠认知功能减退的机制研究

发布时间：2017-11-06 07:33

  本文关键词：miR-106a致去卵巢小鼠认知功能减退的机制研究

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【摘要】：目的：绝经后妇女认知功能障碍是指妇女绝经后由于长期缺乏内源性雌激素的保护，脑组织中与认知功能密切相关的神经元功能明显受损从而引发的认知功能障碍。该病继续发展会导致严重的阿尔兹海默病（Alzheimer’s disease，AD），现已成为当今妇科内分泌领域急需研究的热点问题。microRNAs（miRNAs）是一类长约22个核苷酸的小分子非编码RNA，其抑制靶蛋白的合成从而参与细胞分化、生长发育、增殖、死亡等一系列重要生命活动。miRNAs在脑组织中表达丰富，且在认知功能减退以及阿尔茨海默病等神经退行性疾病中发挥极其重要的作用。 我们在前期研究的基础上，，选择去卵巢（OVX）小鼠模拟绝经后妇女，深入研究miRNAs在OVX小鼠认知功能减退中的发病机制。进一步探讨miNRAs对绝经后妇女认知功能的影响，为绝经后妇女认知功能障碍的防治提供新思路。方法：选择ICR雌性成年小鼠共90只，将其分为OVX后6周组，OVX后8周组，OVX后12周组及其年龄匹配的对照组。观察各时间点小鼠去卵巢后的动情周期，体重和子宫湿重的变化来判断造模效果；通过Morris水迷宫实验测定小鼠逃避潜伏期和平台象限滞留时间百分比来判断认知功能的变化。RealtimePCR对各组小鼠海马组织进行miR-106a的初步验证；通过生物信息学预测miR-106a可能的候选靶基因；采用Realtime PCR和Western blot的方法检测OVX组小鼠和对照组小鼠海马组织中JAK2/STAT3基因及JAK2/STAT3/p-STAT3蛋白水平的表达情况；构建miR-106a模拟物（mimics）及抑制剂（inhibitors）转染SH-SY5Y细胞系，进一步验证miR-106a对靶基因的调控作用；通过构建STAT33UTR荧光素酶报告载体，验证JAK23UTR序列中是否包含miR-106a的结合位点。结果：OVX术后小鼠动情周期消失，体重明显升高（P0.01），子宫湿重显著降低（P0.05）；Morris水迷宫实验证实OVX后12周模型小鼠出现学习记忆功能减退，即逃避潜伏期明显延长（P0.05）及滞留平台象限时间百分比缩短（p0.01）；miR-106a在OVX后12周的模型小鼠海马组织中表达水平明显升高（p0.05），并且其表达水平与STAT3mRNA水平和p-STAT3蛋白水平呈负相关（p0.05）；通过体外SH-SY5Y细胞系的实验，我们发现miR-106a过表达可以明显降低STAT3/p-STAT3蛋白水平；荧光素酶报告载体实验证实STAT33UTR序列中包含miR-106a的两个结合位点。结论：STAT3可能是miR-106a重要的功能靶点，miR-106a的过表达可能通过下调STAT3mRNA和p-STAT3蛋白的表达来影响JAK2/STAT3信号通路，从而参与去卵巢小鼠认知功能减退的发生。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363

【共引文献】

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本文编号：1147932