LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达

发布时间：2017-11-08 23:16

  本文关键词：LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达

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【摘要】：目的构建LIF慢病毒载体,转染人脂肪间充质干细胞,以此获得高表达LIF的人脂肪间充质干细胞,为LIF在人脂肪间充质干细胞介导的免疫调节效应机制研究中奠定基础。方法以PCR扩增得到LIF基因序列,采用质粒重组技术获得载有LIF基因的重组质粒,然后用重组质粒包装慢病毒。用胶原酶消化法分离培养人脂肪间充质干细胞,然后将慢病毒转染人脂肪间充质干细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,采用流式细胞技术检测慢病毒转染率,RT-PCR及Western blot技术检测LIF的表达水平,最后经SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析,计量资料均以(x±s)表示,组间均数比较采用成对样本t检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果通过PCR技术扩增得到LIF基因序列,并且成功构建带有LIF基因的重组质粒,重组质粒经限制性内切酶双酶切鉴定,得到大小为608 bp左右的条带,大小与LIF基因序列匹配,通过重组质粒转染293T细胞后获得慢病毒颗粒,滴度检测达1×108TU/ml。成功分离得到纯度高的h ASCs,慢病毒转染h ASCs后,流式细胞仪检测慢病毒转染率可达90%。RT-PCR及Western blot结果经统计学分析提示,转染后LIF的表达水平明显升高。结论携带人LIF基因的慢病毒载体可以有效转染h ASCs,并且表达LIF。
【作者单位】： 浙江省温州医科大学附属第一医院神经内二科;
【基金】：浙江省自然科学基金(Y2101091,LY13H090010,LY14H130002) 浙江省高校“十二五”神经生物学重点学科(204-071006)
【分类号】：R329.2;Q78
【正文快照】： 近年来,间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植为神经系统疾病如多发性硬化(Multiplesclerosis,MS)、脑卒中等的治疗带来了新希望[1]。MSCs是中胚层来源的具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞[2]。此外,MSCs还具有低免疫原性和免疫调节等特性,MSCs具备的上述特性

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本文编号：1159273