去甲肾上腺素与CGRP对体外培养乳鼠心肌细胞αB-晶体蛋白表达的影响

发布时间：2017-11-09 06:25

  本文关键词：去甲肾上腺素与CGRP对体外培养乳鼠心肌细胞αB-晶体蛋白表达的影响

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【摘要】：目的观察去甲肾上腺素(Norepinephrine, NE)与降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide, CGRP)单独使用,以及NE与CGRP混合使用对体外培养乳鼠心肌细胞aB-晶体蛋自(aB-crystallin, Cryab)表达的影响。 方法(1)乳鼠心肌细胞体外培养与鉴定。选用健康Wistar大鼠,1-3天龄,雌雄不拘,用于心肌细胞体外培养模型的建立。采用免疫细胞化学SABC法对所培养的心肌细胞进行鉴定。 (2)NE对体外培养乳鼠心肌细胞αB-晶体蛋白表达的影响。取16孔心肌细胞,将其随机分为四组,每组4孔(n=4)。C组,对照组；NE8组(10-8mol/L);NE7组(10-7mol/L);NE6组(10-6mol/L)。各组给药作用1h后采用Western blot技术检测αB-晶体蛋白表达量。另取3孔心肌细胞采用免疫荧光双标法对心肌细胞中αB-晶体蛋白进行定位检测。 (3) CGRP对体外培养乳鼠心肌细胞αB-晶体蛋白表达的影响。取24孔心肌细胞,将其随即分为六组,每组4孔(n=4)。C组;CGRP11组(10-11mol/L); CGRP10组(10-10mol/L); CGRP9组(10-9mol/L); CGRP8组(10-8mol/L);CGRP7组(10-7mol/L)。各组给药作用1h后采用Western blot技术检测αB-晶状体蛋白表达量。 (4)NE与CGRP混合对体外培养乳鼠心肌细胞αB-晶体蛋白表达的影响。取16孔心肌细胞,将其随机分为四组,每组4孔(n=4)。C组;NE组(10-6mol/L);NC组(10-6mol/L NF和10-10mol/L CGRP);NC8组(10-6mol/L NE、10-10mol/LCGRP和10-9mol/LCGRP8-37)。各组给药作用1h后采用Western blot技术检测aB-晶体蛋白表达量。 (5)NE与CGRP混合对体外培养乳鼠心肌细胞αB-晶体蛋白mRNA表达的影响。取15孔心肌细胞,将其随机分为五组,每组3孔(n=3)。C组；NE组(10-6mol/L);NC组(10-6mol/LNE和10-10mol/LCGRP);NC8组(10"6mol/L NE、10-10mol/L CGRP和10-9mol/L CGRP8-37); CGRP组(10-10mol/L)。各组给药作用1h后采用Rt-PCR技术检测αB-晶体蛋白mRNA表达量。 结果(1)乳鼠心肌细胞体外培养成功,经检测,心肌细胞占所培养细胞总数的90%以上。 (2)正常心肌细胞中存在大量αB-晶体蛋白；且αB-晶体蛋白在心肌中主要分布于细胞核周围,在细胞质中亦有大量分布。 (3)与对照组(C组)比较,NE8细、NE7组、NE6组三组中Cryab的表达量均出现下调,且以NE6组下调作用最明显(P0.01)。 (4)与对照组(C组)比较,CGRP11组、CGRP10组、CGRP9组、CGRP8组、CGRP7组五组中Cryab的表达量均出现上调,且这五组与C组之间的差异均具有统计学意义(P0.01)。并以CGRP10组作用最明显(P0.01)。 (5)与对照组(C组)比较,NE组Cryab的农达出现了明显下降(P0.01)；与NE组比较,NC组Cryab的表达出现了明显上调(P0.05)：与NC组比较,NC8组Cryab的表达有一定的下调趋势,但不明显(P0.05)。 (6)与对照组(C组)比较,NE组、NC组、NC8组和CGRP组Cryab mRNA的表达均出现了下调,且以NE组、NC组最明显(P0.05);与NE组比较,NC组Cryab mRNA的表达出现了轻微上调,但不明显(P0.05)；与NC组比较,NC8组Cryab mRNA的表达出现了轻微上调,但不明显,(P0.05)。 结论(1)NE可抑制体外培养心肌细胞Cryab的农达。 (2) CGRP可上调体外培养心肌细胞Cryab的表达。 (3) CGRP可在一定程度上逆转由NE抑制的体外培养心肌细胞Cryab的表达。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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1 王涛,余志斌,谢满江,车红磊;新生大鼠心肌细胞培养技巧[J];第四军医大学学报;2003年02期

2 肖卫民,袁开宇,肖献忠,尢家，

本文编号：1160682