人HPPCn重组蛋白可溶性表达及其增殖活性检测

发布时间：2017-11-09 07:03

  本文关键词：人HPPCn重组蛋白可溶性表达及其增殖活性检测

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【摘要】：HPPCn是一种新的肝细胞刺激因子,获得较高纯度的具有生物活性的HPPCn蛋白对研究其生物学功能具有重要意义。HPPCn在重组质粒PET-24a(+)/HPPCn中,诱导表达产物主要以包涵体形式为主。为优化表达条件,运用冷休克表达载体pColdⅡ和无缝克隆技术获得重组质粒pColdⅡ/HPPCn,分别对诱导温度、时间、分子伴侣等诱导条件进行筛选,镍离子柱亲和层析纯化,Western blot分析目的蛋白特异性,不同浓度人HPPCn重组蛋白(0、10、100ng/ml)刺激SMMC7721细胞,免疫细胞化学方法测定Brdu掺入、PCNA表达变化。目的蛋白在培养温度为16℃,终浓度为0.1mmol/L的IPTG过夜诱导时为可溶性表达,最终得到人重组HPPCn蛋白纯度为94.88%,人HPPCn重组蛋白可刺激SMMC7721细胞Brdu掺入增加、PCNA表达水平上调,其刺激作用具有量效关系。通过冷休克表达系统获得可溶性表达的人重组HPPCn蛋白,其具有促进SMMC7721细胞增殖的生物学功能,为深入研究HPPCn的作用机制提供了技术条件。
【作者单位】： 郑州大学第二附属医院;中国人民解放军海军总医院基础医学研究中心;中国人民解放军第148医院;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81472350,31071256)资助项目
【分类号】：R3416;Q786
【正文快照】： 哺乳动物肝脏在损伤后具有很强的再生能力,肝脏再生是一个复杂的过程,许多基因和细胞因子(如HGF、EGF、IL-6、TNF-α等)以不同的作用机制参与调节肝脏再生,但是这些细胞因子均缺乏特异性。1975年,La Breque等[1]首次从肝脏中发现能特异性刺激肝细胞增殖的物质,即肝刺激物(hepa

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本文编号：1160775