D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克

发布时间：2017-11-09 07:22

  本文关键词：D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探

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【摘要】：[目的]获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白,制备鼠源性多克隆抗体,鉴定蛋白免疫原性。 [方法]聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因,将其插入pZeroBack载体,对pZeroBack/pgp3和原核表达载体pGEX-6p-1进行酶切后连接,产物转化入大肠埃希菌DH5a,提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21并经IPTG诱导表达,Western印迹鉴定目的蛋白,GST磁珠(GST MagBeads)纯化pgp3-谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白(pgp3-GST融合蛋白)。用纯化后的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体,Western印迹、细胞免疫荧光鉴定抗体的特异性,间接ELISA法测定抗体滴度。 [结果]克隆目的基因测序长度为795bp,序列与GeneBank中一致,Western印迹显示目的蛋白分子量约为54000,并得到纯化的蛋白。获得鼠源性多克隆抗体,经Western印迹和细胞免疫荧光鉴定抗体可特异性结合pgp3蛋白,ELISA测定所得抗体滴度为1：819200。 [结论]成功表达并纯化具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白,并且成功制备具有高效价、高特异性的抗pgp3多克隆抗体,为沙眼衣原体的致病机理和临床诊断治疗的相关研究提供依据。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392

【参考文献】

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3 马t焥，

本文编号：1160860