IL-17及JAK抑制剂AG490对泡沫化巨噬细胞ABCA1表达的影响

发布时间：2017-11-09 09:11

  本文关键词：IL-17及JAK抑制剂AG490对泡沫化巨噬细胞ABCA1表达的影响

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【摘要】：目的: 白介素-17（Interleukin-17，IL-17）是新近发现的一个促炎症细胞因子，具有致动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的作用，酪氨酸蛋白激酶-信号转导及转录激活因子（Janus kinase signal transducers and activators of transcription，JAKs-STATs）是其发挥作用的途径之一。三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ATP-binding cassette transporter，ABCA1）在细胞中的主要作用为促进细胞内胆固醇运输和减少细胞内的炎症因子。双面神激酶（Janus kinase，JAK）抑制剂2-氰基-3-(3，4-二羟基苯基)-N-(苯甲基)-2-丙烯酰胺(2-cyano-3-(3，4-dihydroxyphenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide，AG490)为JAK抑制剂，能阻断JAKs-STATs信号通路。本文通过观察IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达情况，探讨IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞的作用。 方法: 1.检测IL-17对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达情况：THP-单核（Thp-1monocyte，THP-1）细胞经佛波酯（phorbol12-myristate13-acetate，PMA）（100nmol/L）诱导24h-48h形成巨噬细胞，经氧化低密度脂蛋白（oxidizedlow density lipoprotein，ox-LDL）(50μg/mL)泡沫化后建立巨噬细胞泡沫化模型，油红O乙醇染液鉴定泡沫化巨噬细胞。上述泡沫化巨噬细胞中分别加入IL-17（100ng/mL），不同时间点（0h，6h，12h，24h）收取细胞，分别提取RNA及蛋白，RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达。上述泡沫化巨噬细胞中加入IL-17(0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），24h后收取细胞，分别提取RNA及蛋白，RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达。 2.检测JAK抑制剂AG490与IL-17对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达情况: IL-17（100ng/mL）及AG490（0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L）共处理泡沫化巨噬细胞24h后收取细胞，分别提取RNA及蛋白，RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达。 结果: 1.THP-1细胞呈圆形，，悬浮生长，经PMA（100nmol/L）诱导24h-48h后成为梭形的贴壁巨噬细胞，并伸出伪足，ox-LDL(50μg/mL)诱导巨噬细胞形成泡沫化巨噬细胞，其特征为脂质成份增多，聚集成滴，能被油红O乙醇染液染成红色。 2.随着泡沫化巨噬细胞中IL-17浓度的增加（0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达随着IL-17浓度增加而减少（p＜0.05），随着泡沫化巨噬细胞中IL-17作用时间的延长（0h、6h、12h、24h），RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达随IL-17作用时间增加而减少（p＜0.05）。 3.JAK抑制剂AG490与IL-17（100ng/mL）共同处理泡沫化巨噬细胞后，RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达随着泡沫化巨噬细胞中AG490浓度增加（0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L）而增加（p＜0.05）。 结论: 1.通过ox-LDL诱导巨噬细胞能够成功构建巨噬细胞泡沫化模型。 2.IL-17能够减少泡沫化巨噬细胞ABCA1mRAN及蛋白的表达，并呈时间和浓度依赖性。 3.AG490能够减弱IL-17对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达，提示IL-17可能通过JAKs-STATs信号通路影响ABCA1表达。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李帅;黄健;;ABCAl介导胆固醇转运的机制及其信号传导通路研究进展[J];华夏医学;2011年01期

2 赵国军;唐朝克;;ApoA-Ⅰ与ABCA1结合激活信号通路并介导细胞内胆固醇流出[J];中南医学科学杂志;2011年04期

3 方正旭;朱亮;李鸣媛;王伶;刘东;程晓曙;;AG490对凝血酶诱导VSMCs增殖及Bcl-2表达的影响[J];南昌大学学报(医学版);2010年03期

4 陈样新,傅国胜,聂文成;血清妊娠相关血浆蛋白-A与急性冠状动脉综合征的临床相关性[J];临床心血管病杂志;2004年05期

5 王振坤;范永臻;郭志刚;;ABCA1主要调节者-核激素受体[J];临床心血管病杂志;2010年03期

6 李帅;黄健;李红艳;莫新玲;左晓娜;;NO/PKG对THP-1巨噬细胞ABCA1基因mRNA表达和胆固醇含量的影响[J];临床心血管病杂志;2011年10期

7 薛偕华;魏伟;陈彤;周晓茂;林志诚;陈立典;;泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其LXRα和ABCA1表达的影响[J];中国动脉硬化杂志;2013年11期

8 祁莉萍;严晓伟;叶平;陈连凤;;ABCA1-565C/T基因多态性对心梗患者来源的巨噬细胞胆固醇外流功能影响及其机制研究[J];中国全科医学;2010年13期

9 李建华;杨永红;吴平生;郭志刚;;血管平滑肌细胞中ABCA1对炎症因子的调节及其意义[J];实用医学杂志;2010年10期

10 黄伟彬;吕磊;张岚;;JAK/STAT信号通路在动脉粥样硬化中的作用[J];上海交通大学学报(医学版);2013年04期

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1 来超;白介素-17在颈动脉粥样硬化性狭窄动物模型中的表达[D];山东大学;2011年

本文编号：1161215