2型猪链球菌AdcR蛋白的原核表达

发布时间：2017-11-11 07:42

  本文关键词：2型猪链球菌AdcR蛋白的原核表达

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【摘要】：目的表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)调控因子AdcR蛋白,为研究其在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白的作用机制奠定基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找出编码AdcR的基因。以AdcR基因序列为基础,利用Primer5.0设计引物,采用PCR扩增AdcR基因,经BamHⅠ和HindIII双酶切后将目的片段通过T4DNA连接酶连接至表达载体pET32a,转化大肠埃希菌E.coli BL21,加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L,37℃诱导4h表达AdcR蛋白,然后利用His亲和层析柱纯化AdcR蛋白。结果通过Blast分析,从2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找到编码AdcR的编码基因05SSU0109。以合成的特异引物PCR扩增出469bp的AdcR片段,连接原核表达载体pET32a后转化E.coli,经IPTG 37℃诱导4h,成功表达出AdcR蛋白,其分子质量单位为40ku,与理论值相符。经His-Tag亲和层析纯化,获得较高纯度的重组AdcR蛋白。结论在大肠埃希菌中成功表达了可溶性的AdcR重组蛋白,为AdcR在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白作用机制研究奠定了基础。
【作者单位】： 南京师范大学生命科学学院;南京军区军事医学研究所;南京大学生命科学学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81071317,81172794,31170124) 南京军区医学科技创新课题(No.ZX39)
【分类号】：R378.12
【正文快照】： 原核生物体内含有大量的金属调节蛋白(metalsensor proteins),其功能是作为转录调节子,调节编码金属特异性、细胞膜结合进出系统以及胞质金属螯合剂等基因的转录,从而控制细胞内金属离子的浓度[1-2]。其中,AdcR(adhesin competence repressor)是原核生物中广泛存在的转录阻遏

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 邵珠卿;潘秀珍;韩明月;李先富;秦跃红;王长军;唐家琪;;组氨酸三聚体蛋白在2型猪链球菌的定位[J];临床检验杂志;2009年06期

2 侯田青;郭静静;邵珠卿;李先富;王长军;潘秀珍;;2型猪链球菌组氨酸三聚体蛋白家族05SSU1267的克隆、表达及免疫保护作用研究[J];免疫学杂志;2012年03期

3 赵华梅;潘秀珍;王长军;郭恒彬;李先富;唐家琪;;猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定[J];中国人兽共患病学报;2006年01期

4 张凤玉;胡丹;吕恒;张锦海;郝丽娜;龚秀芳;操敏;郑峰;耿美玲;朱进;李丙军;潘秀珍;王长军;;2型猪链球菌89K毒力岛Ⅳ型分泌系统LAMP检测方法的建立[J];中国病原生物学杂志;2014年02期

5 王晶;李敏;杜骁杰;王玲;李先富;王长军;高基民;潘秀珍;;2型猪链球菌表面蛋白Sao的生物信息学分析及基因工程疫苗的设计[J];中国病原生物学杂志;2014年03期

6 杜骁杰;潘秀珍;;真核样丝氨酸/苏氨酸激酶在链球菌中的研究进展[J];中国病原生物学杂志;2014年03期

7 李敏;高基民;潘秀珍;;链球菌组氨酸三聚体家族蛋白的研究进展[J];中国病原生物学杂志;2014年07期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 付明哲;刘璐;宋晓平;阴明亮;魏拣选;;自动细菌鉴定及药敏测试仪对猪链球菌的快速分离鉴定[J];安徽农业科学;2010年22期

2 唐佳;严琼;焦春堂;;人猪链球菌2型检测结果分析[J];重庆医学;2009年21期

3 李先富;潘秀珍;赵华梅;王长军;唐家琪;;2型猪链球菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的制备与鉴定[J];东南国防医药;2010年05期

4 卿泰安;颜运秋;黎满香;;湖南省猪链球菌的分离鉴定与药敏试验[J];动物医学进展;2007年05期

5 拜廷阳;吴志明;刘光辉;杨增岐;普志平;闫若潜;;猪致病性链球菌的分离鉴定[J];动物医学进展;2007年11期

6 陈阳;吴迪;陈雪燕;赵焕灿;扈鸿霞;Cheick A Diakite;方维焕;;猪链球菌2型分离株对野生斑马鱼的致病性[J];动物医学进展;2008年06期

7 李逢慧;罗超;程天印;;猪链球菌2型CPS2J基因PCR检测技术研究进展[J];动物医学进展;2008年07期

8 王建;鞠龚讷;刘佩红;沈莉萍;徐锋;;猪链球菌灭活苗的免疫攻毒保护试验[J];动物医学进展;2008年08期

9 郝春燕;王利勤;王晶钰;;猪链球菌的分离鉴定及药敏试验[J];动物医学进展;2010年05期

10 闵成军;刘亚彬;;猪链球菌的致病性[J];动物医学进展;2010年S1期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 纪雪;孙洋;刘军;祝令伟;何永聚;冯书章;;猪链球菌2型毒力相关蛋白E的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年

2 张健;拜廷阳;闫若潜;赵明军;盛敏;吴志明;;猪链球菌9型荧光定量PCR检测方法的建立及应用[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年

3 郑腾;;2型猪链球菌病检测技术的最新进展[A];福建省科协第六届学术年会卫星会议“增强科技创新能力，，促进优质畜牧业发展”研讨会论文集[C];2006年

4 闵成军;刘亚彬;;猪链球菌的致病性[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

5 李鹏;刘军;何永聚;冯书章;;猪链球菌2型新毒力基因研究进展[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年

6 李先富;潘秀珍;韩明月;王长军;唐家琪;;2型猪链球菌ZnuA蛋白免疫保护作用的研究[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文汇编[C];2010年

7 陈国强;唐泰山;邓碧华;张敬友;张常印;陆承平;;猪链球菌2型溶血素基因的检测[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王长军;高致病性2型猪链球菌分子致病机理研究[D];南京医科大学;2009年

2 郑峰;Rgg转录调节因子对高致病性2型猪链球菌毒力与代谢的调控研究[D];第三军医大学;2011年

3 赵岩;Ⅳ型分泌系统在高致病性2型猪链球菌引发链球菌中毒性休克综合征中作用的研究[D];第三军医大学;2011年

4 李冉;猪链球菌感染猪脾脏的表达谱研究及新型亚单位疫苗研制[D];华中农业大学;2011年

5 刘曼莉;猪链球菌2型感染宿主后宿主表达谱的分析研究[D];华中农业大学;2011年

6 汪洋;猪链球菌生物被膜形成及致病机理研究[D];南京农业大学;2011年

7 韩先干;猪链球菌2型LuxS/AI-2型密度感应系统研究[D];南京农业大学;2008年

8 尉研;猪链球菌2型二元调控系统2148hk/rr的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

9 欧瑜;猪链球菌2型毒力相关蛋白的检测及其基因片段的克隆与表达[D];南京农业大学;2001年

10 马有智;猪链球菌溶血素基因的克隆及其原核和真核表达[D];浙江大学;2003年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 慕小凤;猪链球菌2型IgA1 protease的鉴定及致病性研究[D];华中农业大学;2010年

2 冯晓丹;猪链球菌2型强毒株05ZYH33二元信号转导系统CiaRH生物学功能研究[D];南京医科大学;2009年

3 董瑞萍;唾液酸与2型猪链球菌致病性关系的研究[D];南京医科大学;2009年

4 秦跃红;2型猪链球菌srtBCD基因簇菌毛样结构蛋白SSU2101生物学功能研究[D];南京医科大学;2010年

5 张振苹;黄河口地区致病性猪链球菌分离鉴定与主要毒力因子的PCR检测[D];山东农业大学;2010年

6 陈红娜;猪链球菌2型srtBCD菌毛簇基因功能初步研究[D];南京医科大学;2011年

7 宋洁;中国猪链球菌2型强致病株体内诱导表达基因的筛选研究[D];第三军医大学;2011年

8 方圆子;猪链球菌噬菌体SMP裂解酶在乳酸乳球菌中的表达及活性研究[D];上海交通大学;2011年

9 唐晓萍;上海地区生猪屠宰产品中猪链球菌2型和戊型肝炎病毒两种人兽共患病病原的调查[D];上海交通大学;2009年

10 邢娟;猪链球菌分子分型新方法研究及健康猪群猪链球菌菌株耐药性检测[D];甘肃农业大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 唐家琪,朱进,郭恒彬,胡晓抒,朱凤才,刘光中;猪链球菌引起人中毒性休克综合征和脑膜脑炎的流行病学调查及病原学研究[J];第三军医大学学报;2001年11期

2 曹照明;曹兴建;曹季军;陈相;王朔;;猪链球菌2型感染动物模型的建立[J];临床检验杂志;2007年03期

3 季红峰;潘秀珍;郑峰;王长军;朱进;唐家琪;;猪链球菌2型二肽酶Ⅳ的克隆、表达及酶活性鉴定[J];临床检验杂志;2007年06期

4 邵珠卿;潘秀珍;韩明月;李先富;秦跃红;王长军;唐家琪;;组氨酸三聚体蛋白在2型猪链球菌的定位[J];临床检验杂志;2009年06期

5 吕燕波,万瑛,吴玉章;SARS病毒基因组所编码的E蛋白的二级结构和B细胞表位预测[J];免疫学杂志;2003年06期

6 刘丽娜;胡福泉;朱军民;赵岩;陈志瑾;唐家琪;;猪链球菌2型疫苗候选分子FBP的表达及免疫学活性研究[J];免疫学杂志;2008年02期

7 韩明月;潘秀珍;邵珠卿;李先富;刘文静;郑峰;王长军;唐家琪;;2型猪链球菌中国强毒株znuA基因的原核表达及免疫学活性分析[J];免疫学杂志;2010年03期

8 侯田青;郭静静;邵珠卿;李先富;王长军;潘秀珍;;2型猪链球菌组氨酸三聚体蛋白家族05SSU1267的克隆、表达及免疫保护作用研究[J];免疫学杂志;2012年03期

9 沈海旺;陈亨莉;曹敏杰;蔡秋凤;毛海燕;苏文金;刘光明;;甲壳类动物4种过敏原的序列分析、抗原表位预测及三维结构建模[J];免疫学杂志;2012年07期

10 杜骁杰;郭静静;王晶;李敏;王玲;王长军;潘秀珍;;2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶重组蛋白的制备及鉴定[J];医学研究生学报;2014年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨华富,朱凤才,史智扬,庄菱,顾玲,郭喜玲,胡晓杼,汪华;人-猪链球菌感染性综合征的病原特征分析[J];中国人兽共患病杂志;2001年06期

2 张淑伟;鲁成武;;猪链球菌2型的致病机制[J];生命的化学;2006年02期

3 贾勇;罗隆泽;景怀琦;李燕春;郭宗琪;谌浪;颜雯雯;张守印;;猪链球菌四川资阳分离株特征分析[J];预防医学情报杂志;2007年06期

4 赵华梅;潘秀珍;王长军;郭恒彬;李先富;唐家琪;;猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定[J];中国人兽共患病学报;2006年01期

5 徐公义;王海丽;王长军;唐家琪;葛长城;吕云鹏;吕俊;;猪链球菌Ⅱ型致病机理研究进展[J];中国人兽共患病学报;2008年08期

6 黎明;马超;李学如;杨思源;;猪链球菌铁元素吸收及其机理研究进展[J];中国人兽共患病学报;2014年01期

7 董国英,李敏,向华;人畜共患新病原——猪链球菌2型的研究进展[J];广东畜牧兽医科技;2005年05期

8 祝令伟;蔡雪辉;刘军;齐

本文编号：1170465