结核分枝杆菌脂蛋白G在HEK293T细胞中的表达及纯化

发布时间：2017-11-11 21:15

  本文关键词：结核分枝杆菌脂蛋白G在HEK293T细胞中的表达及纯化

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【摘要】：目的构建含结核分枝杆菌(MTB)脂蛋白G(Lpr G)基因的真核表达载体pc DNA3.1-His-Lpr G-FLAG,并在HEK293T细胞中表达和纯化Lpr G融合蛋白。方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板,用PCR法扩增Lpr G基因,并通过DNA重组构建真核表达载体pc DNA3.1-His-Lpr G-FLAG,酶切鉴定并测序。将重组质粒转染HEK293T细胞后,应用Western blot法检测His-Lpr G-FLAG融合蛋白的表达。利用Ni-NTA金属亲和层析柱从细胞上清和细胞裂解液中纯化融合蛋白His-Lpr G-FLAG,并用SDS-PAGE和Western blot法检测纯化后的蛋白。结果成功构建了pc DNA3.1-His-Lpr G-FLAG的真核表达载体,Western blot结果表明转染质粒后,HEK293T细胞裂解液中检测到目的蛋白,相对分子量(Mr)为27 000。经Ni-NTA金属亲和层析柱纯化后得到高纯度的融合蛋白His-Lpr G-FLAG。结论成功构建并在HEK293T细胞中表达和纯化了His-Lpr G-FLAG融合蛋白。
【作者单位】： 广西医科大学医学检验系广西医科大学第一附属医院检验科;重庆医科大学检验医学院;同济大学附属上海市肺科医院检验科结核病临床研究中心上海市结核病(肺)重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(81371775)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是导致结核病发生的主要致病菌。结核病严重威胁着人类公共卫生安全,全世界每年增加约1000万名TB患者,其中约1 7 0万人死于结核病[1]。目前用于结核病预防的疫苗是卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG),但是长期的临床应用显示

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本文编号：1172902