脐带间充质干细胞对阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡影响的研究

发布时间：2017-11-14 04:24

  本文关键词：脐带间充质干细胞对阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡影响的研究

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【摘要】：背景：间充质干细胞是中胚层来源的多能干细胞,具有高度自我更新和多向分化潜能,不仅能在体外培养扩增,而且在特定条件下可以被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及神经细胞等。它存在广泛,在全身多种组织中均可分离培养,是细胞替代治疗和组织工程的重要种子细胞,具有广阔的临床应用前景。在目前注册的临床试验中,间充质干细胞被应用于多种疾病,包括自身免疫性疾病、器官移植、慢性炎症及组织损伤等,并取得了较好的疗效。肿瘤是目前人类健康的主要威胁之一,以其高发病率及高死亡率引起极大的关注,成为研究的热点。目前研究显示,尽管肿瘤细胞自身及其相关基因突变在肿瘤的发病中起重要作用,其生存所需的肿瘤微环境对肿瘤的作用同样不可忽视。构成肿瘤微环境的成分非常复杂,间充质干细胞是其中重要的组成部分,因此,间充质干细胞与肿瘤的关系引起人们极大的兴趣,并进行了一系列的研究,但却出现了许多相互矛盾的结果,其中涉及到的机制,仍有待进一步的研究。 目的：脐带是间充质干细胞的重要来源,因其取材方便、传代能力强并且没有伦理学限制等特点,成为最具临床应用前景的间充质干细胞。本研究旨在观察人脐带间充质干细胞对急性髓细胞白血病细胞系HL-60的影响,尤其是其对化疗药物的敏感性的影响,并对涉及其中的机制进行探讨,为人脐带间充质干细胞在急性白血病患者中的应用提供一定的理论基础。 方法：(1)在诱导体系中,定向诱导人脐带间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞分化,用油红O染色、Von Kossa染色观测脂滴形成、钙盐沉积情况以鉴定人脐带间充质干细胞的多向分化潜能。(2)应用流式细胞仪检测阿糖胞苷诱导的HL-60细胞单独培养及与人脐带间充质干细胞共培养时的凋亡情况。(3)应用流式细胞仪检测与人脐带间充质干细胞共培养对HL-60细胞细胞周期的影响。(4)应用Real-time PCR方法及Western Blot方法检测与人脐带间充质干细胞共培养对HL-60细胞中Caspase3的mRNA和蛋白水平表达情况的影响。(5)应用transwell细胞共培养体系研究人脐带间充质干细胞发挥作用的机制。(6)在共培养体系中加入信号通路阻断剂,观测阻断信号通路对人脐带间充质干细胞保护作用的影响。 结果：(1)分离出的人脐带来源间充质干细胞具有多向分化能力。(2)阿糖胞苷可以诱导HL-60细胞凋亡,且具有时间-剂量依赖性。人脐带间充质干细胞可以减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡,与细胞之间的比例没有太大关系。(3)与人脐带间充质干细胞共培养可以将HL-60细胞阻滞在G0/G1期,阻止其进入S期。(4)人脐带间充质干细胞可以降低阿糖胞苷诱导的HI-60细胞内凋亡蛋白Caspase3的mRNA和蛋白水平的表达。(5)在transwell培养体系中,人脐带间充质干细胞同样可以减少阿糖胞苷诱导的HI-60细胞凋亡。(6)PI3K/Akt信号通路参与到人脐带间充质干细胞的保护作用,当使用信号通路阻断剂处理时,可以部分逆转人脐带间充质干细胞的作用。 结论：人脐带间充质干细胞通过分泌可溶性细胞因子减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡。其机制可能与通过调节HL-60细胞周期及下调Caspase3表达相关。PI3K/Akt信号通路参与这种保护作用。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

【共引文献】

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本文编号：1183848