T细胞活化接头蛋白棕榈酰化位点突变抑制CD59 GPI介导的T淋巴细胞活化信号转导

发布时间：2017-11-20 21:01

  本文关键词：T细胞活化接头蛋白棕榈酰化位点突变抑制CD59 GPI介导的T淋巴细胞活化信号转导

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【摘要】：目的构建T细胞活化接头蛋白(LAT)棕榈酰化位点突变的慢病毒,感染Jurkat细胞,建立稳定转染的细胞株,观察LAT棕榈酰化位点突变对CD59介导的T淋巴细胞活化信号转导的影响。方法构建阴性对照(neg-EGFP)、LAT-M-EGFP融合蛋白基因载体,包装成慢病毒,分别感染Jurkat细胞,建立稳定感染的细胞株。激光共聚焦显微镜观察病毒感染效率及融合蛋白在细胞上的定位;CCK-8法检测CD59单克隆抗体交联前后各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测磷脂酶Cγ1(PLC-γ1)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)蛋白的表达。结果共聚焦显微镜观察发现LAT-M组细胞的LAT分子在细胞膜上散在分布,CD59抗体交联刺激后,未出现明显的点簇状聚集区。与阴性对照细胞相比,LAT-M细胞增殖活性明显降低,中晚期凋亡细胞明显增加;Western blot结果显示,LAT-M组的PLC-γ1、LCK蛋白表达水平和阴性对照组大致相同,经抗体活化后无明显变化,而阴性对照细胞的PLC-γ1、LCK蛋白表达量下降。结论 LAT棕榈酰化位点突变的Jurkat细胞脂筏定位功能缺失,细胞处于抑制状态,对CD59糖基磷脂酰肌醇(GPI)介导的T淋巴细胞活化信号转导有抑制作用。
【作者单位】： 青岛大学医学院免疫学教研室;
【基金】：国家自然科学基金(81273206) 青岛市公共领域科技支撑计划项目[12-1-3-5-(2)-nsh]
【分类号】：R392
【正文快照】： CD59即糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚固糖蛋白[1],广泛表达于多种组织细胞表面。CD59除作为一种补体调节蛋白(complement regulatoryproteins,CRP)抑制攻膜复合物(membrane attack complex,MAC)形成外,近年来还发现其在T细胞活化信号转导中发挥重要作用

【参考文献】

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本文编号：1208466