雷帕霉素对UUO大鼠模型肾组织肥大细胞Tryptase、PAR-2和TGF-β1表达的影响
发布时间：2017-11-24 17:20
本文关键词：雷帕霉素对UUO大鼠模型肾组织肥大细胞Tryptase、PAR-2和TGF-β1表达的影响
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【摘要】：目的：肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展到终末期共同的病理改变，其发生发展过程中肾小管上皮间质转分化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)、肌成纤维细胞激活等机制，起到了重要作用。纤维化是一个多因子多细胞参与的复杂的动态过程，炎性细胞及其分泌的各种炎性因子发挥了重要的作用，尤其是肥大细胞（mast cell，MC）在其中的作用是不可忽略的。当受刺激时，，MC以胞吐方式大量释放颗粒内的物质，如类胰蛋白酶（Tryptase，Try）、白三烯、前列腺素、血小板活化因子、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及多种白细胞介素(IL)等，这些物质能促进成纤维细胞增生、细胞外基质积聚、导致肾组织纤维化。Try是公认的肥大细胞特异性标志物，对成纤维细胞、平滑肌细胞、支气管上皮细胞具有促进有丝分裂的作用。Try能增加微血管的通透性，刺激炎症细胞移行，促进其成熟和细胞因子释放。IgA肾病、急慢性间质性肾炎时Try可以激活肾小管上皮细胞PAR-2，从而分泌TGF-β1，使Ⅰ型胶原纤维生成增多，细胞外基质增多。雷帕霉素对肥大细胞所致的食物过敏反应大鼠模型有治疗作用，还有研究报道对于肥大细胞增生症也有一定的作用。在UUO模型中，肥大细胞的浸润是否也起到一定的作用、雷帕霉素对肥大细胞及其分泌的炎性因子有何影响，还不太明确，因此，我们通过动物模型，进行相关的研究，寻找雷帕霉素治疗肾纤维化的另一有力证据。本课题拟通过建立单侧输尿管梗阻（unilateralurethral obstruction，UUO）的大鼠肾间质纤维化模型，结合HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色等检测手段，观察雷帕霉素对肾间质纤维化大鼠肾组织中肥大细胞Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达的影响，探讨雷帕霉素对肾间质纤维化的保护作用，为临床防治肾间质纤维化提供试验性理论依据。 方法：选择清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠54只，雄性，健康，体重(200±20)克，适应性喂养1周后，随机分为三组：假手术组(Sham组)、输尿管结扎组(UUO组)、雷帕霉素干预组(Rapa组)，每组各18只。每组又分别于术后第4、7、14天分批取出梗阻侧肾组织，分别为D4、D7、D14组，每组各6只。UUO组、Rapa组大鼠结扎左侧输尿管，Sham组仅游离左侧输尿管。各组于手术前1天开始给药，每天灌胃1次，每周复查体重，调整给药量。Rapa组以雷帕霉素2mg/kg/d灌胃，Sham组及UUO组以等容的生理盐水灌胃，实验期间自由进食水。各组分别于术后第4天、7天、14天随机选取6只大鼠分三批取出梗阻侧肾组织，置于固定液中，包埋、制成切片（1）分别采用苏木素伊红(HE)染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理变化；（2）采用免疫组织化学方法测定肾间质肥大细胞特异标志物Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达。 结果应用图像分析系统IPP(Image-Pro Plus)进行半定量分析。实验数据用均数±标准差(x±S)表示，各组间比较采用单因素方差分析（满足正态性和方差齐性），不满足正态性和方差齐性的数据资料采用非参数检验，相关性分析各变量之间的相关性用Pearson或Spearman检测。应用SPSS13.0统计分析软件对实验数据进行统计学处理，以P0.05为具有统计学意义。 结果：光镜下观察各组肾脏组织HE染色,UUO组显示肾小管间质中炎症细胞增多，小管细胞呈现不同程度的变性、萎缩及坏死，小管周围肾间质随着输尿管梗阻时间的延长增宽，Rapa组与之相比较，病变程度较轻，Sham组无明显病变；Masson染色显示，UUO组肾小管扩张逐渐加重，肾间质胶原纤维的含量逐渐增加，提示肾间质纤维化程度逐渐加重；和UUO组相比，对应的Rapa组肾脏组织病理学变化较轻，Sham组无明显胶原纤维沉积。 结合IPP图像分析系统分析免疫组织化学染色结果显示：Tryptase、PAR-2、TGF-β1在Sham组各时期均未见明显的阳性表达；UUO组和Rapa组中三个因子均于术后第4天即有表达，并且随着梗阻时间表达逐渐升高；Tryptase主要表达于肾小球周围、肾间质，PAR-2主要表达于肾小管上皮细胞，TGF-β1主要表现在肾间质和肾小管上皮细胞；在第4、7、14天三组之间的表达水平比较均为：UUO组Rapa组Sham组（P0.05）。 结论： （1）UUO大鼠模型中，肥大细胞的浸润与肾间质纤维化的严重程度有密切关系，提示肥大细胞可能参与了肾间质纤维化的发生； （2）UUO术后大鼠肾脏Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达逐渐升高；提示肥大细胞可能通过肥大细胞-Tryptase-PAR-2-TGF-β1途径参与肾间质纤维化； （3）雷帕霉素干预后，Tryptase、PAR-2、TGF-β1三者的表达水平下降，提示雷帕霉素可能通过减少肥大细胞浸润，进而Tryptase表达减少，减轻单侧输尿管结扎大鼠肾脏间质纤维化的程度。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R965;R-332
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 刘雪梅,朱红艳,甄s
本文编号：1223021
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