人β防御素的改构及活性研究

发布时间：2017-11-29 17:18

  本文关键词：人β防御素的改构及活性研究

  更多相关文章： 人β防御素 杀菌活力 盐敏感性 透射电镜 细胞毒性 构效关系 原核表达纯化

【摘要】：目的：以人β防御素（hBDs）为基础，通过改变特定氨基酸序列获得原防御素的突变体，旨在提高其杀菌活力，同时降低盐敏感性，并初步探讨防御素的构效关系与机理。摸索防御素的原核表达途径。 方法：（1）Fmoc法合成防御素，对合成后的防御素进行初步的纯度分析以及结构分析。（2）对合成的防御素进行杀菌以及盐敏感性的分析，并应用透射电镜观察防御素的作用方式。（3）用MTT法对合成防御素进行细胞毒性分析，，同时通过溶血实验来分析其对血细胞的毒性。（4）将hBD-3进行原核表达纯化。 结果：（1）在人β防御素1-4（hBD-1-4）中，hBD-3对测试菌有最强的杀菌活力及最强的耐盐活力，对测试菌株的百分之九十杀死率（LD90）在15μg/ml以下。同时，合成的hBD-1抑菌活力很低，LD90超过100μg/ml。合成的hBD-2,4抑菌活力弱于hBD-3（P＜0.01），但并没有发现明显的对革兰氏阴阳菌的选择性。（2）hBD-3的N端缺失突变体当失去前9个氨基酸时活性及耐盐能力显著下降（P＜0.01），而失去前3个氨基酸的突变体耐盐能力显著提高（P＜0.01）。（3）经过I区替换的改构防御素都有着比hBD-3更强的杀菌活力及耐盐能力，而它们各自的N端缺失突变体杀菌活性及耐盐能力降低。（4）改构体在耐盐能力提高的同时，它们的细胞毒性以及溶血毒性也相应提高。（5）电镜结果显示，防御素作用于细菌后，破坏细胞壁的同时造成质壁分离，导致细菌死亡。（6）成功构建了原核表达载体表达出融合蛋白GST-hBD-3。 结论：（1）在hBD1-4中，hBD-3的活性，耐盐能力在所测试的菌株中最强，可以将它作为改构的模板。（2）hBD-3的N端区域对防御素的盐敏感性有着重要作用。（3）hBD-3的I区对防御素杀菌活力有着重要影响。而对于防御素杀菌活性与细胞毒性的关系，需要在后期实验中进一步研究。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R394

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 王可洲,李浩,刘学玲,朱键,冯墨竹,舒心;抗菌肽的分类及作用机理研究进展[J];科学技术与工程;2005年07期

2 周绪霞,陆平,李卫芬;昆虫防御素及其研究进展[J];免疫学杂志;2004年S1期

3 彭力,徐志南,方向明,吴金民,岑沛霖;人防御素的研究进展[J];生物工程学报;2003年03期

4 李洪军,胡宗利,魏泓;防御素(Defensin)研究进展[J];生物工程进展;2001年03期

5 徐灵龙;王云峰;石星明;童光志;;抗菌肽及其功能研究[J];中国生物工程杂志;2007年01期

6 张继南;陈红霞;;抗菌肽及其应用研究进展[J];生物技术通讯;2006年04期

7 韩文瑜;孙长江;;抗菌肽的研究现状与展望[J];中国兽药杂志;2009年10期

8 刘媛媛;赵宝华;;防御素的研究进展和应用前景[J];中国医药生物技术;2009年04期

本文编号：1237522