自制壳聚糖—酵母多糖微球抗白色念珠菌的研究

发布时间：2017-12-04 19:27

  本文关键词：自制壳聚糖—酵母多糖微球抗白色念珠菌的研究

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【摘要】：目的：探索壳聚糖和酵母多糖对白色念珠菌的作用，并以壳聚糖和酵母多糖为原料制备微球，考察壳聚糖-酵母多糖微球对大鼠白色念珠菌肺炎的疗效。 方法： 1.采用XTT减低法评价壳聚糖对96孔培养板内白色念珠菌生物膜的生长阶段活性的影响。以荧光显微镜、扫描电镜观察壳聚糖对生物膜内死活菌和形态结构的影响。不同浓度的酵母多糖注射于大鼠体内，提取所有大鼠肺组织内总RNA并利用PCR技术检测Dectin-1(Dentritic cell-associated C-type lectin-1)的表达。 2.采用乳化交联法，对药物比、油水比、搅拌速度、交联剂、交联时间几项因素进行分析，选出优于制备微球的条件。通过扫描电镜和红外光谱对所制微球性质和表面形态进行分析。 3.建立免疫低下大鼠肺部感染白色念珠菌模型，随机分组为模型组、壳聚糖组、联合用药组和微球组。分别给予相应药物治疗后，HE染色观察各组大鼠肺组织病理变化。Real-time PCR检测Dectin-1、TLR2（Toll-like receptor2）mRNA的表达, ELISA检测IL-10、TNF-α水平。 结果： 1.0.0313%壳聚糖对白色念珠菌浮游菌和早期生物膜有明显的抑制作用。随着生物膜的成熟，0.0625%壳聚糖才能够显著地抑制生物膜生长。通过荧光显微镜和扫描显微镜下观察0.0625%壳聚糖能有效杀死生物膜内菌体并延缓生物膜形成。低中高浓度的酵母多糖能上调大鼠体内Dectin-1的表达，但高浓度酵母多糖可能引起全身炎症反应。 2.用乳化交联法制备微球操作简单且稳定。在药物比为3:2，油水比为8:1，搅拌速度为600rpm，以戊二醛饱和的甲苯溶液作为交联剂条件下，所制微球通过电镜观察表面成球型，分散性好,大小基本均匀，红外光谱证实壳聚糖-酵母多糖微球内壳聚糖和酵母多糖交联成功。 3.自制壳聚糖-酵母多糖微球应用于感染白色念珠菌肺炎的大鼠体内，壳聚糖-酵母多糖微球组肺组织炎症明显减轻，且体内Dectin-1、TLR2、IL-10水平明显较模型组和壳聚糖组升高。而壳聚糖-酵母多糖微球组体内TNF-α水平明显较模型组降低。 结论： 1.壳聚糖具有杀灭白色念珠菌和抑制起生物膜形成的作用。酵母多糖对大鼠体内Dectin-1具有上调作用。 2.乳化交联法制备微球工艺简单。经过优化后工艺稳定适合制备微球。 3.壳聚糖酵母多糖微球能显著提高感染白色念珠菌肺炎的大鼠体内Dectin-1、TLR2表达，促进IL-10分泌并调节抑制TNF-α，，以达到抗白色念珠菌肺炎的作用。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R379.4

【参考文献】

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本文编号：1252110