ANP32A基因敲减对体外多柔比星诱导的心肌细胞凋亡的影响

发布时间：2017-12-04 21:35

  本文关键词：ANP32A基因敲减对体外多柔比星诱导的心肌细胞凋亡的影响

  更多相关文章： ANP32A 心肌细胞凋亡 多柔比星 bcl-2/bax miR-21

【摘要】：目的： 通过体外实验观察敲减ANP32A基因对多柔比星诱导的心肌细胞凋亡的影响，探讨其可能的机制。并进一步探讨ANP32A与miR-21在心肌细胞中的关系，为心力衰竭提供新的治疗策略。 方法： (1)通过PCR技术体外合成ANP32A对应基因片段，定向克隆至U6-vshRNA-CMV-GFP慢病毒表达载体，构建ANP32A基因敲减慢病毒表达载体（ANP32A/GV115-RNAi）；用同样的方法构建miR-21基因过表达慢病毒表达载体（rno-miR-21(Ubi)）。 (2)实验分五组：①control组：即空白对照组，仅SD大鼠乳鼠的原代心肌细胞；②GFP组：即空载体组，转染NC-GFP-LV至心肌细胞；③DOX组：心肌细胞+多柔比星（DOX）；④ANP32A敲减组：转染ANP32A基因敲减慢病毒表达载体至心肌细胞；⑤ANP32A敲减+DOX组：转染ANP32A基因敲减慢病毒表达载体至心肌细胞后加入多柔比星（DOX）。 (3)培养SD大鼠乳鼠的原代心肌细胞，心肌细胞鉴定；通过PCR、westernblot方法检测ANP32A在心肌细胞中的表达；心肌细胞培养后加入不同浓度的多柔比星（DOX）诱导细胞凋亡，通过流式细胞仪定量检测细胞凋亡率，MTT方法检测细胞的存活率；转染ANP32A基因敲减慢病毒表达载体至心肌细胞后加入DOX诱导心肌细胞凋亡，通过MTT方法检测细胞的存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，western blot检测bcl-2及bax蛋白的表达；转染miR-21基因过表达慢病毒表达载体至心肌细胞，检测ANP32A的表达差异性。 (4)实验数据以均数±标准差表示，用SPSS17.0统计学软件对实验结果进行多组间单因素方差分析或t检验，P0.05有统计学意义。 结果： (1) Western blot鉴定及DNA测序表明， ANP32A基因敲减慢病毒表达载体构建成功；PCR及DNA测序表明miR-21基因过表达慢病毒表达载体构建成功。分别转染至心肌细胞72h后，转染效率均达到70%以上，， Western blot结果显示ANP32A的蛋白表达明显下调，qRT-PCR结果显示miR-21的mRNA表达上调。因此，本实验选择转染72h作为进一步研究的时间点。 (2) ANP32A在SD大鼠乳鼠的原代心肌细胞中有表达。 (3)转染ANP32A基因敲减慢病毒表达载体后加入DOX干预（ANP32A敲减+DOX组）与仅加入多柔比星组（DOX组）相比心肌细胞的凋亡率显著减少；ANP32A敲减+DOX组与DOX组相比，bcl-2的蛋白表达明显上调， bax的蛋白明显下调；敲减ANP32A基因部分抑制了多柔比星（DOX）所产生的效应。 (4)转染miR-21基因过表达慢病毒表达载体后的心肌细胞中ANP32A的表达水平明显低于空白对照组。 结论： (1) ANP32A在SD大鼠乳鼠的原代心肌细胞中有表达 (2)敲减ANP32A基因明显抑制多柔比星诱导的心肌细胞凋亡， ANP32A具有促心肌细胞凋亡的作用。 (3)过表达miR-21可抑制心肌细胞中ANP32A的表达，ANP32A可能为miR-21在心脏上的另一个靶点。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 汤坚梅,陈莹莹,夏强;心肌细胞凋亡研究进展[J];浙江医科大学学报;1999年02期

2 陈吉球,梁丽凡,肖军;心肌细胞凋亡[J];医学综述;2000年07期

3 李志刚;死亡受体及其配体与心肌细胞凋亡[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2002年03期

4 宋志宙;杨思进;;心肌细胞凋亡时基因调控的研究进展[J];西部医学;2007年03期

5 刘晓春,刘正湘,施静;人参对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2000年03期

6 黄辉,陈建萍;心肌细胞凋亡机制的研究进展[J];西藏医药杂志;2000年02期

7 董建文,朱卫中,周兆年;低氧与心肌细胞凋亡[J];细胞生物学杂志;2004年05期

8 朱理安,关瑞锦,胡锡衷;柯萨奇B3病毒引起心肌细胞凋亡的初步探索[J];中华微生物学和免疫学杂志;2000年03期

9 齐丽彤,张钧华,高萌,周爱儒;缺氧对乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用[J];中国介入心脏病学杂志;1998年03期

10 陈淦;汤长发;;不同强度运动对大鼠心肌细胞凋亡的影响[J];生命科学研究;2012年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 赵宇光;李薇;;基质细胞衍生因子-1β对高脂诱导心肌细胞凋亡的预防作用及机制[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

2 王筠;刘畅;;内质网应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

3 吕秀秀;王华东;余小慧;;小檗碱抑制去甲肾上腺素诱导心肌细胞凋亡的机制研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

4 张峰;梁宏;祁章年;黄增明;张晓春;张恒太;王根良;;γ射线全身照射对小鼠血液和心肌细胞凋亡的影响[A];中国空间科学学会空间生命专业委员会2003年中国空间生命科学与航天医学会议论文摘要集[C];2003年

5 张璐洁;吕进泉;;心梗局部高表达整合素连接激酶抑制心肌细胞凋亡改善心脏收缩功能[A];2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2012年

6 师绿江;尹昭云;洪欣;辛益妹;贺鹏飞;任宏伟;韩行湛;关景芳;;金属硫蛋白对加速度致心肌细胞凋亡的影响[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

7 庞锦江;许荣q;徐向斌;曹济民;赵三妹;单惠敏;陈晨;;Hexarelin对血管紧张素Ⅱ诱导离体心肌细胞凋亡的抑制作用[A];中国生理学会肥胖的临床与基础暨神经免疫内分泌学术研讨会论文摘要汇编[C];2003年

8 蒋东;郑世营;葛锦峰;赵军;;缺血预处理减轻在体家兔心肌细胞凋亡[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年

9 董建文;丁海雷;朱海峰;朱卫中;周兆年;;间歇性低氧减少缺血再灌注引起的大鼠心肌细胞凋亡[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

10 庞锦江;许荣q;徐向斌;曹济民;赵三妹;单惠敏;陈晨;;Hexarelin对血管紧张素Ⅱ诱导离体心肌细胞凋亡的抑制作用[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 本报记者 慕欣;PNS可否抑制心肌细胞凋亡？[N];医药经济报;2010年

2 记者 郑福汉 见习记者 甘青;执着的追求[N];咸宁日报;2006年

3 记者 王丹;防治心肌梗死有新靶点[N];健康报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘祥娟;蛋白激酶D在糖尿病心肌病中的作用及分子机制研究[D];山东大学;2015年

2 康波;硫化氢通过miR-1-Bcl-2通路抑制缺血再灌注心肌细胞调亡的实验研究[D];第二军医大学;2015年

3 王琳;氯离子通道阻断剂对内质网应激诱导心肌细胞凋亡的保护作用及分子机制[D];第四军医大学;2015年

4 丛晓强;低剂量联麦氧钒调节高糖诱导内质网应激减轻心肌损伤作用的研究[D];吉林大学;2016年

5 望庐山;基于PI3K/Akt通路探讨“标本配穴”电针干预心肌细胞凋亡的实验研究[D];湖北中医药大学;2016年

6 江雪;可溶性高级糖基化终末产物受体通过JAK2/STAT3通路抑制心肌缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡的研究[D];首都医科大学;2016年

7 张云鹤;体外心脏震波治疗在大鼠急性心肌梗死心肌细胞凋亡中的作用和机制研究[D];北京协和医学院;2016年

8 万春云;过氧化氢诱导鸡心肌细胞凋亡的转录组学研究[D];华中农业大学;2016年

9 卢青;枸橼酸预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡和再灌注心律失常的影响及其分子机制研究[D];南方医科大学;2016年

10 李国华;PI3K-PKB/Akt-GSK-3β信号通路在FGF-2心肌保护中的作用研究[D];南华大学;2016年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王古平;新型小分子AF-HF001抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡研究[D];江南大学;2015年

2 葛晨;微小RNA-214对脓毒症小鼠心肌损伤的作用[D];河北医科大学;2015年

3 马苗苗;β3-AR对心肌细胞凋亡的影响及介导机制研究[D];石河子大学;2015年

4 王伟涛;SP600125对脑死亡大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制研究[D];郑州大学;2015年

5 王娟;二甲基甲酰胺通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的实验研究[D];安徽医科大学;2015年

6 郁U

本文编号：1252418