去分化间充质干细胞再成骨分化潜能研究

发布时间：2017-12-04 23:12

  本文关键词：去分化间充质干细胞再成骨分化潜能研究

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【摘要】：第一部分：去分化间充质干细胞的诱导及生物学特性 目的：诱导去分化间充质干细胞(De-differentiated mesenchymal stem cell,De-MSCs)，研究其生物学特性，为全面研究De-MSCs提供物质基础。 方法:从健康成人骨髓中分离培养出间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSCs），经流式细胞仪(FACS)表型鉴定后采用更换培养基方法诱导去分化间充质干细胞(De-MSCs)，观察De-MSCs形态学变化，FACS检测De-MSCs细胞表型，cck8（Cell count kit，，CCK）检测比较MSCs和De-MSCs增殖效率差异。 结果： De-MSCs形态上回复到MSCs样长梭形，流式细胞仪分析结果显示De-MSCs表达MSCs某些干细胞表面标志，cck8法检测细胞增殖率表明De-MSCs相比MSCs有较高增殖效率。 结论：De-MSCs在形态和干细胞表面标志表达上与MSCs一致，但是增殖能力更强，为MSCs样细胞。 第二部分：去分化间充质干细胞体外再成骨潜能分析 目的：研究人骨髓来源的去分化间充质干细胞(De-MSCs)在体外再次成骨分化潜能和效率，探讨De-MSCs潜在临床应用价值。 方法:将MSCs和De-MSCs同时成骨诱导7天成为MSCs-ob和De-MSCs-ob，分别采用实时定量PCR（qPCR）检测成骨相关基因，21天后采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红染色法和形态学观察检测比较De-MSCs和MSCs成骨分化效率。 结果：qPCR显示De-MSCs成骨相关基因BMP2,Runx2,DLX5,Osterix,Beta-c表达较MSCs明显增强， ALP活性检测与茜素红染色显示De-MSCs具有较强成骨能力。 结论：体外研究显示De-MSCs再次成骨分化效率较高，为其临床应用提供实验依据，为满足临床和组织工程需要提供更适宜的种子细胞。 第三部分：去分化间充质干细胞体内再成骨潜能分析 目的：去分化间充质干细胞(De-MSCs)作为优质种子细胞是目前组织工程和再生医学领域研究的热点。本实验根据De-MSCs体外再次成骨分化的结果，研究De-MSCs体内再次成骨分化潜能，评估De-MSCs在骨组织工程中的潜在应用价值，为进一步的临床应用提供实验依据。 方法：将De-MSCs和MSCs按照相同的浓度种植在胶原模块上，置成骨培养基诱导4小时后将负载细胞的移植胶原模块入重症联合免疫小鼠(SCID)皮下进行体内异位成骨实验，分别于7天和28天进行qPCR、碱性磷酸酶ALP活性检测和HE组织切片，免疫组化观察。 结果：qPCR检测分析显示De-MSCs较MSCs的成骨相关基因表达水平(BMP2,Runx2,DLX5,Osterix,Beta-c)高，且碱性磷酸酶ALP活性检测结果显示De-MSCs再成骨组较MSCs成骨组高（p0.05），表明De-MSCs在体内成骨分化的效率较MSCs高。HE组织切片结果可见明显成骨现象，免疫组化结果见骨组织中成骨细胞胞膜II型胶原阳性表达。 结论：De-MSCs具有更强的成骨分化潜能，可作为骨组织工程优质种子细胞进行进一步的研究，为再生医学的应用提供更加丰富的理论依据和实验基础。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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1 袁石福;张伟滨;沈宇辉;朱雅萍;王s

本文编号：1252691