1、人TNFR1-PLAD及其突变体基因克隆与表达纯化及其生物学活性鉴定 2、小鼠TNF-α及其突变体基因克隆与表达鉴定

发布时间：2017-12-05 01:25

  本文关键词：1、人TNFR1-PLAD及其突变体基因克隆与表达纯化及其生物学活性鉴定 2、小鼠TNF-α及其突变体基因克隆与表达鉴定

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【摘要】：TNFR1胞外段含有四个半胱氨酸富集区（CDR）区，在与TNF-α结合前首先通过CDR1区形成三聚体，所以CDR1区又称为PLAD（pre-ligand assemblydomain）。本课题组前期研究采用噬菌体展示技术分别用sTNF-α和TNFR1为诱饵筛选到12AA的“TNF结合肽”和“TNFR封闭肽”，体内、体外实验均证实两种肽都对TNF-α介导的生物学效应有较好的抑制作用。但由于短肽自身半衰期较短，极易通过肾小球滤过，无法充分发挥应有的药效。因此，本实验利用分子克隆技术及蛋白纯化技术获得PLAD三聚体化所需的关键肽段，试图将该片段分别连接到“TNF结合肽”和/或“TNFR封闭肽”末端，使之通过TNFR1-PLAD的自身三聚化作用而聚合为三聚体，，延长两种肽在体内的的半衰期，为进一步研发抗TNF-α药物奠定基础。 随着人们生活水平日益提高，肥胖也变得越来越普遍，全球范围内超重的人群数量多于体重不足的人群数量。随着肥胖的流行，肥胖相关的一些疾病的发病率如代谢综合征、非酒精性脂肪肝和II型糖尿病等也不断增加，而胰岛素抵抗是这些疾病发病机制中的一个关键环节，但其细胞水平的机制尚不完全清楚。肿瘤坏死因子-（TNF-α）作为脂肪组织分泌的脂肪细胞因子，它参与调节食欲、胰岛素敏感性以及炎症反应等各种生理和病理过程。TNF-α又分跨膜型（tmTNF-α）和分泌型（sTNF-α），tmTNF-α、sTNF-α都可以与TNFR相互作用，但引起的生物学功能并不相同。我们实验室前期工作表明：tmTNF-α可杀伤对sTNF-α耐受的肿瘤细胞株，sTNF-α主要诱导细胞坏死，而tmTNF-α则主要诱导凋亡，因此推测tmTNF-α在胰岛素抵抗中可能发挥的作用与sTNF-α也不相同。本文成功构建表达野生型TNF-α-（即可表达sTNF-α，也可表达tmTNF-α）的TNFpIRES2-GFP-wtTNF质粒、只表达tmTNF-α的pIRES2-GFP-tmTNF-α的质粒和只表达sTNF-α的pIRES2-GFP-sTNF-α质粒，并将其稳定转染3T3-L1前脂肪细胞，以便进一步在体外比较研究两型TNF-α对高糖诱导的胰岛素抵抗的影响及其分子机制。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416

【共引文献】

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本文编号：1253081