凝血酶—富血小板血浆复合物影响体外培养的人软骨细胞生长的实验研究

发布时间：2017-12-05 14:11

  本文关键词：凝血酶—富血小板血浆复合物影响体外培养的人软骨细胞生长的实验研究

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【摘要】：目的：通过在体外培养的人软骨细胞时，加入不同浓度的凝血酶-富血小板血浆(PRP)复合物，检测人软骨细胞增殖数量，软骨细胞RNA合成总量以及合成II型胶原量的变化，，探索凝血酶-富血小板血浆(PRP)促进体外培养的人软骨细胞生长的作用。 方法： 1.人软骨细胞培养，并传代至第3代。 2.制备人富血小板血浆。 3.按如下浓度制备凝血酶-富血小板血浆(PRP)复合物。每20ul富血小板血浆中含凝血酶2.2ul，凝血酶浓度分别为10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50Uu/ml、60U/ml、70U/ml、80U/ml、90U/ml、100U/ml、200U/ml、500U/ml和1000U/ml。 4.取第三代软骨细胞，按1×104个接种于96孔培养板，待细胞贴壁并同步化后分组，每5孔为一组。阴性对照组：只含DMEM培养液；阳性对照组：DMEM培养液+PRP；实验组：DMEM培养液+PRP+不同浓度凝血酶)；实验组分为：10U/ml组、20U/ml组、30U/ml组、40U/ml组、50U/ml组、60U/ml组、70U/ml组、80U/ml组、90U/ml组、100U/ml组、200U/ml组、500U/ml组、1000U/ml组,在培养1天后用cck-8（细胞增殖）法检测各组OD值，根据OD值对应的凝血酶浓度得出本实验最适凝血酶浓度，然后与常规使用的凝血酶浓度1000U/ml通过PCR扩增, PCR反应产物分析等方法对软骨细胞分泌II型胶原蛋白基因表达的比较。结果采用SPSS统计软件分析。以了解不同凝血酶浓度对体外培养的人软骨细胞生长的影响。 结果： 1.人软骨细胞培养，原代细胞一般24-72小时贴壁，8-10天形成单层细胞。传代培养至第3代，细胞生长旺盛。 2. OD值：①阴性对照组(均数±标准差)与阳对照组(均数±标准差)比较无统计学意义（P＞0.05），②实验组(均数±标准差)与阴性对照组(均数±标准差)比较有统计学意义（P0.05），③实验组(均数±标准差)与阳性对照组(均数±标准差)比较有统计学差异（P0.05）。④实验组内，凝血酶为10U/ml、20U/ml及80U/ml-1000U/ml与60U/ml比较有统计学差异（P0.05），60U/ml促增殖作用高于10U/ml、20U/ml及80U/ml-1000U/ml，30U/ml-50U/ml及70U/ml与60U/ml比较无统计学意义（P＞0.05），但从10U/ml-60U/ml促软骨细胞增殖作用逐级上升并呈浓度依赖关系。从70U/ml组开始促进软骨细胞增殖作用减弱，80U/ml-1000U/ml之间比较无统计学意义（P＞0.05）。 3.软骨细胞合成分泌二型胶原蛋白结果：根据PCR灰度值，凝血酶60U/ml的软骨细胞分泌II型胶原蛋白基因表达高于凝血酶1000U/ml（P0.05）。 结论:本实验结果显示：在体外培养的人软骨细胞中，加入凝血酶-富血小板血浆复合物能促进软骨细胞的增殖,在实验中随着凝血酶浓度增高其促进软骨细胞增殖作用反而减弱，低浓度凝血酶促进软骨细胞增殖更好，其中又以60U/ml为最适浓度。
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：1255084