人妊娠特异性β1糖蛋白的原核表达及其抗体制备

发布时间：2017-12-06 08:31

  本文关键词：人妊娠特异性β1糖蛋白的原核表达及其抗体制备

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【摘要】：妊娠特异性β1糖蛋白（Pregnancy Specific β1Glycoprotein, PSG1）是一种胎盘多肽，自1971年德国科学家Bohn从人胎盘中分离提纯以来，各国学者对其进行了广泛的研究。发现PSG1与早孕并发症、宫内胎儿生长状况及妇科肿瘤疾病关系密切，对临床上相关疾病的诊断具有指示作用。因此，近年来对PSG1的研究受到广泛关注。本研究采用基因工程重组技术制备得到PSG1蛋白，并通过免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠分别得到抗PSG1的多克隆和单克隆抗体，为PSG1蛋白在孕妇产前胎盘功能检测试剂盒的研制及临床相关疾病的治疗研究提供理论依据。 1.基因表达：根据已报道的人PSG1基因序列，采用RT-PCR的方法从人胎盘组织中获得PSG1基因。将所得的PCR产物插入pGEM-T质粒载体中，经酶切及测序鉴定正确后，构建pCzn1-PSG1表达质粒，转入E. coli ArcticExpressTM(DE3)中进行高效表达，并采用亲和层析等方法，提取、纯化得到分子量约为45kDa的PSG1蛋白。 2.多克隆抗体的制备：以PSG1为免疫原对新西兰大白兔进行免疫，获得了抗PSG1的多克隆抗体，采用抗原特异性亲和层析的方法对抗体进行纯化，纯度大于90%，用间接ELISA方法测得其纯化后抗血清效价不低于1:1.28×105。 3.单克隆抗体的制备：以PSG1为免疫原对BALB/c小鼠进行免疫，采用杂交瘤技术获得了抗PSG1的单克隆抗体，采用抗原特异性亲和层析的方法对抗体进行纯化，纯度在95%以上，用间接ELISA方法测得纯化后单抗腹水效价不低于1:2.43×105。 本研究成功获得具有良好特异性和免疫原性的PSG1蛋白，并制备了高效价、高特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，，为进一步研制用于临床的PSG1免疫学检测试剂盒奠定基础。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392

【共引文献】

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本文编号：1258006