Toll样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制

发布时间：2017-12-06 16:26

  本文关键词：Toll样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制

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【摘要】：目的:探索Toll样受体(Toll like receptor,TLR)-4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制。方法:Percoll密度梯度离心法分离原代大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),流式细胞术鉴定细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90。用Transwell小室建立干细胞(上室)-成骨细胞(下室)共培养体系,在此体系下对BMSCs进行破骨细胞诱导培养。将共培养体系分为TLR-4激活组和空白组,前者以TLR-4激动剂LPS(10 ng/m L)激活,后者加入等体积PBS。在诱导培养第6天,对上室细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,计数并比较各组破骨细胞数。同时,蛋白质印迹检测各组下室细胞悬液中核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)的蛋白表达,观察电泳条带并行定量分析。结果:密度离心法获得原代大鼠BMSCs,流式细胞分析检测显示CD34阴性、CD44、CD54和CD90阳性。TRAP染色阳性细胞为破骨细胞,细胞计数显示,TLR-4激活组破骨细胞数明显多于空白组(t=13.556,P0.05)。蛋白质印迹结果显示,TLR-4激活组RANKL的表达明显多于空白组(t=17.630,P0.05)。结论:在成骨细胞共培养体系下,激活TLR-4能够促进BMSCs向破骨细胞分化,其机制可能与TLR-4促进成骨细胞分泌RANKL有关。
【作者单位】： 江苏大学附属医院骨科;华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科;
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 干细胞定向分化的调节是近年来的研究热点之一,许多信号分子参与其中,Toll样受体(Toll likereceptor,TLR)就是其中之一。TLR不仅能调节干细胞的增殖[1],还能调节干细胞向成骨方向的分化[2]。我们前期实验结果表明,TLR-4作为干细胞表面主要的TLR亚型之一,在大鼠骨髓间充质干细

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