破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察

发布时间：2017-12-08 02:02

  本文关键词：破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察

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【摘要】：目的采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动,初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法 1用脂质体转染方法(阳离子脂质体Lip2000)转染EB1-GFP基因至Raw264.7细胞系,G418筛选转染成功的Raw264.7细胞,荧光显微镜下观察后GFP蛋白免疫荧光染色确定稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞系建立;2活细胞工作站下观察转染EB1-GFP的Raw264.7细胞中EB1蛋白的运动;3用含100ng/m LRANKL和30ng/m L M-CSF的培养基分别诱导稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞为破骨细胞,进行TRAP染色鉴定,比较两组细胞形态有无差别;4Raw264.7细胞系诱导出破骨细胞后,用细胞免疫荧光染色方法观察破骨细胞EB1蛋白的形态及分布;5活细胞工作站下观察稳转EB1-GFP的Raw264.7细胞诱导出的破骨细胞内EB1蛋白的运动状态。结果 1脂质体转染方法建立了稳定转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞系;2观察到破骨前体细胞Raw264.7的微管正端蛋白(EB1)的运动轨迹;3转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞诱导的破骨细胞TRAP染色无明显差别;4活细胞工作站观察破骨细胞微管正端蛋白EB1的运动状态,结果表明破骨细胞微管活动性较破骨前体细胞Raw264.7活动性低。结论 1EB1-GFP基因对破骨前体细胞系Raw264.7诱导破骨细胞无明显影响;2微管活动性降低可能与破骨细胞骨吸收活性相关。
【作者单位】： 南京军区南京总医院骨科;
【基金】：江苏省临床医学科技专项资助(BL2012002)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 正常骨组织的维持建立在破骨细胞的骨吸收和成骨细胞骨形成的动态平衡基础上。破骨细胞数目改变和活性改变是导致各种代谢性骨病的主要原因,因此破骨细胞成为了研究的热点和重点。近年来的研究认为细胞骨架在破骨细胞功能的发挥中起重要作用,破骨细胞分化成熟后,由微丝组成的

【参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：1264599