CRISPR敲减猪CMAH基因的质粒构建及慢病毒的包装
本文关键词：CRISPR敲减猪CMAH基因的质粒构建及慢病毒的包装
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【摘要】：目的:构建靶向猪CMAH基因的慢病毒CRISPR-Cas9敲减质粒及进行慢病毒的包装。方法:设计并合成CMAH基因gRNA的靶序列并将其与Lenti CRISPR-v2载体连接;连接后转化大肠杆菌DH5α,筛选出重组子后酶切鉴定与测序;制备VSV-G、Rev、Gag/Pol等质粒用于包装慢病毒。结果:成功构建猪CMAH基因CRISPR-Cas9敲减质粒并包装出相应慢病毒。结论:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术能够构建敲减猪CMAH基因的质粒并能够使用其包装出病毒,为后续感染猪动脉内皮细胞(porcine aorta endothelial cell,PAEC)细胞敲减CMAH基因及功能验证奠定基础。
【作者单位】： 深圳市第二人民医院;深圳大学第一附属医院深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心;
【基金】：国家自然科学基金(81200465) 深圳市“三名”工程(驯化器官)项目(2015)
【分类号】：R373
【正文快照】： 猪单磷酸胞嘧啶-N-乙酰神经氨酸羟化酶(cytidinemonophospho-N-acetylneuraminic acid hydroxylase,CMAH)是哺乳动物内将N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)转化成N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)的酶。Neu5Gc和Neu5Ac是哺乳动物体内唾液酸存在的两种形式,而Neu5Gc是Neu5Ac的羟基化衍生物。研究
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8 俞s，
本文编号：1267946
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