不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体文库的体外进化研究

发布时间：2017-12-08 22:35

  本文关键词：不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体文库的体外进化研究

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【摘要】：目的判断不同亚类小鼠IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点,采用不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体展示文库进行亲和筛选。方法不同亚类小鼠IgG对噬菌体文库进行亲和筛选,获得具有结合优势的单结构域排列组合,噬菌体ELISA法来比较其与不同亚类小鼠IgG的结合特性,优势组合分子经原核表达蛋白,HRP标记后,ELISA法进一步来比较其与小鼠不同亚类IgG的结合特性。结果小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3分别经过5、4、5和5轮亲和筛选后,其文库的展示片段大小均为2个domain,表明进化完全。测序分析显示:小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3筛选得到的具有结合优势组合分子分别是D-D、D-D、A-C和D-C。噬菌体ELISA验证结合优势组合分子对小鼠不同亚类IgG的结合能力;蛋白经HRP标记后的ELISA结果和筛选不完全一致,但其结合强弱具有一致性,均为:IgG3IgG2aIgG2bIgG1。结论得到3种不存在于天然SpA、SpG分子中,分别与不同亚类小鼠IgG具有较强结合作用的新型组合分子D-D、A-C和D-C,为进一步研究IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点提供了新的参考分子。
【作者单位】： 安徽医科大学病理生理学教研室;第二军医大学病原生物学教研室;安庆医药高等专科学校;
【基金】：安徽省教育厅自然基金项目(编号:KJ2010A117) 国家自然科学基金(编号:30872405、30872246、30972632、30972799)
【分类号】：R392.7
【正文快照】： 金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal proteinA,SpA)[1]和链球菌蛋白G(Streptococcal protein G,SpG)[2]是研究最多的细菌免疫球蛋白结合蛋白[3],其中SpA的分子量大约57 ku,含有5个具有Ig结合功能且重复串联的结构域,为E、D、A、B、C[4]。SpG分子量为65 ku,包含3个具有Ig结合

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