血清肌钙蛋白-Ⅰ均相化学发光免疫检测体系的初步建立

发布时间：2017-12-09 11:15

  本文关键词：血清肌钙蛋白-Ⅰ均相化学发光免疫检测体系的初步建立

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【摘要】：急性心肌梗死(AMI)作为急性冠状动脉综合征(ACS)最严重的类型,是威胁人类健康的杀手,可致心源性猝死。根据心电图的改变,可分为ST段抬高型急性心肌梗死(STEMI)和非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEMI):STEMI有特征性的心电图改变,便于病人早发现、早治疗,患者的预后较好；而NSTEMI没有特征性的心电图改变,此时心肌标志物的检测对NSTEMI早期诊断和治疗显得尤为重要。心肌肌钙蛋白I(cTnI)对心肌损伤具有高度的敏感性和特异性,已成为诊断AMI诊断首选心脏标志物,并作为评价心肌坏死和诊断心肌梗死的“金标准”。 Tn1是心肌主要收缩蛋白的三个亚单位之一,是肌原纤维ATP酶的抑制性亚单位,分为3种亚型：快骨骼肌亚型(fTnI)、慢骨骼肌亚型(sTnI)和心肌亚型(cTnI)。心肌亚型与其他亚型有约40%的异源性,在氨基端延伸出一段31个氨基酸组成的序列,利用此特性,可提高cTnI诊断AMI的特异性和准确性。cTnI经历了常规方法检测到高敏感方法检测几代检测方法的改进和临床应用研究,高敏cTnI (hs-cTnI)在临床上得到广泛的认同和应用。本研究以鲁米诺氧通道免疫分析技术(LOCI)为基础,建立一种新的检测cTnI的定量方法,该方法具有灵敏度高、均相、免清洗、快速简便等优点。 目的： 以鲁米诺氧通道免疫分析技术(LOCI)为基础,以AlphaScreen均相发光免疫分析技术为平台,初步建立血清肌钙蛋白-I (cTnI)均相化学发光免疫检测体系,并对其进行方法学和临床评价。 方法： 鼠抗人cTnI单克隆抗体、兔抗人cTnI多克隆抗体分别标记受体微球、生物素,组成两对抗体组合,采用棋盘滴定法确定较佳抗体组合；并利用棋盘滴定法确定标记受体微球和生物素化抗体反应的最适工作浓度,同时对实验不同阶段反应时间、试剂加样顺序、加样比例以及方法的缓冲体系进行了优化。在优化基础上建立四参数拟合方程的校准品剂量-反应曲线,测定未知浓度临床标本,得到其发光信号值,由标准曲线即可得出其相应的cTnI浓度。根据上述方法对临床标本进行检测并做方法学及临床评价。研究中采用ELISA Calc软件进行相关统计分析。 结果： 本法建立的测定cTnI均相免疫检测体系是由兔抗人cTnI多克隆抗体包被受体微球、生物素标记鼠抗人cTnI单克隆抗体及链霉亲和素包被供体微球共同组成,该方法快速、敏感,检测时间为17.5mmin；分析灵敏度为0.045ng/mL,功能灵敏度为0.053ng/mL;回收率为104.97%-108.12%；批内精密度为3.88%-5.53%,批间精密度为7.60%-8.75%；特异性分析中溶血、黄疸及脂血的干扰率均10%；采用本方法检测87例健康人cTnI含量,上限为1.05ng/mL;检测40份临床标本结果与直接化学发光检测法所得结果具有良好的相关性(r2=0.979),使用x2检验及一致性分析推断本试剂与直接化学发光检测试剂无统计学差异。 结论： 本研究建立的方法能够用于定量检测血清cTnI,该方法具有均相、免清洗分离、灵敏度高,准确性、重复性好,便于操作等优点,进一步研究有望推广临床应用。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1270176