雪胆素甲对脂多糖活化的巨噬细胞RAW264.7的炎症反应的影响及其机制研究
发布时间：2017-12-14 18:32
本文关键词：雪胆素甲对脂多糖活化的巨噬细胞RAW264.7的炎症反应的影响及其机制研究
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【摘要】：目的： 分析雪胆素甲（cucurbitacin IIa, CuIIa）对脂多糖（LPS）诱导活化的巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响，探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法： MTS法检测CuIIa对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞增殖的影响，Transwell法检测CuIIa对巨噬细胞迁移的影响，SDS-聚丙酰胺凝胶电泳法检测CuIIa对细胞内骨架蛋白G-actin与F-actin的影响。细胞内细胞因子染色法检测CuIIa对LPS诱导活化的巨噬细胞炎症细胞因子TNF-分泌的影响。相差显微镜观察CuIIa对活化的巨噬细胞形态的影响，荧光显微镜观察Hoechst33342染色细胞后细胞核的形态，流式细胞仪检测细胞亚二倍体（凋亡）峰的变化，免疫印迹法检测细胞内MAPKs、NF-B、Caspase-3和LC3B-II相关蛋白的表达情况。荧光显微镜观察细胞内骨架蛋白Actin和自噬相关蛋白LC3B的分布。结果： CuIIa能明显抑制巨噬细胞RAW264.7细胞的增殖，并呈时间和剂量依赖性。CuIIa能显著抑制巨噬细胞迁移（P＜0.05）。CuIIa作用细胞后，能诱导细胞发生Actin聚集，细胞内骨架蛋白G-actin聚集为F-actin聚集体。但是CuIIa并不能抑制LPS活化的巨噬细胞炎症因子TNF-的分泌（P＞0.05）。同时CuIIa对LPS引起的细胞内MAPKs和NF-B炎症信号通路相关蛋白的活化作用均未有显著影响。CuIIa使LPS活化的伸展细胞收缩变圆，伪足突起消失，细胞核内染色质固缩，细胞核碎裂，细胞内发生严重的Actin聚集，说明微丝结构被破坏。随着CuIIa浓度的增加，其诱导LPS活化的RAW264.7细胞处于Sub-G0/G1（凋亡峰）的数量明显增加，但其单独作用于细胞不会有效诱导巨噬细胞发生凋亡。免疫印迹分析显示，，这些效应是Caspase-3依赖的，并伴随着survivin的下调。同时， CuIIa可以增强LPS诱导的RAW264.7细胞自噬，自噬相关蛋白LC3B-II显著增加。荧光显微镜可以明显观察到LPS刺激后细胞内LC3B聚集成点状分布，CuIIa使这种点状LC3B的数量明显增加。结论： CuIIa能剂量依赖性抑制巨噬细胞RAW264.7细胞增殖与迁移，并诱导细胞内肌动蛋白细胞骨架发生聚集。虽然CuIIa不能有效的抑制巨噬细胞炎症细胞因子TNF-的分泌和炎症信号通路蛋白的活化，但其可以有效的诱导活化的巨噬细胞发生凋亡与细胞自噬。这些可能是其发挥抗炎效应的作用机制之一。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【参考文献】
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本文编号：1288944
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