IFN-λ真核表达载体的建立及其表达产物的生物学功能评估

发布时间：2017-12-15 04:21

  本文关键词：IFN-λ真核表达载体的建立及其表达产物的生物学功能评估

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【摘要】：目的构建IFN-λ真核表达体系,检测IFN-λ基因在真核细胞中的表达,评估真核细胞表达IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物学作用。方法从poly I∶C刺激的Hu H-7细胞mRNA中克隆IFN-λ1/2基因全长,并进行DNA基因测序;构建pc DNA3-IFN-λ1/2质粒,酶切鉴定,并将其转染COS-7细胞,应用Western印迹检测IFN-λ1/2在COS-7细胞中的表达。COS-7细胞表达的IFN-λ1/2作用于人食管癌YES5和T.Tn细胞株,CCK-8法检测癌细胞增殖,Western印迹检测凋亡蛋白caspase-3的活化,实时荧光定量PCR检测ISG15及Mx A抗病毒基因表达。结果经PCR、DNA测序和酶切鉴定,克隆的IFN-λ1/2基因与Gen Bank公布的序列一致,IFN-λ1/2基因序列正确构建入pc DNA3载体中;在pc DNA3-IFN-λ1/2转染的COS-7细胞中检测到IFN-λ1/2蛋白表达;其表达产物可诱导食管癌细胞增殖抑制、活化凋亡蛋白caspase-3,并且上调抗病毒ISG15及Mx A基因。结论建立了IFN-λ真核表达体系,即通过pc DNA3-IFN-λ1/2转染COS-7细胞实现了IFN-λ表达;经此体系表达的IFN-λ具有抗增殖、诱导凋亡及上调抗病毒基因表达的生物学作用;此体系的建立为IFN-λ的生物学功能研究和临床应用奠定了基础。
【作者单位】： 河北医科大学基础医学院免疫学教研室;河北医科大学第一医院细胞治疗实验室;河北医科大学第四医院乳腺疾病治疗中心;河北医科大学第一医院妇产科;河北医科大学第一医院内分泌科;河北医科大学流行病与卫生统计学教研室;河北医科大学护理学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81000913) 河北省科学技术研究与发展计划资助项目(10396101D) 河北省科技计划资助项目(13397703D) 河北省应用基础研究计划重点基础研究项目(14967719D,15962704D) 河北省医学科研研究重点课题计划指导项目(20150626)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 2002年10月,“细胞因子与干扰素”会议在意大利都灵举行,Kotenko在会议上首次报告发现了新型人干扰素lambda(IFN-λs)。2003年,相关论文在Nature Immunology杂志发表。IFN-λs是一个全新的Ⅲ型干扰素家族,家族成员包括干扰素λ1、λ2和λ3,同时被命名为IL-29、IL-28A和IL-28B;

【共引文献】

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本文编号：1290608