靶向血管生成素-2基因短发夹RNA真核表达载体的构建及内质网应激状态下对人脐静脉内皮细胞凋亡影响的观察

发布时间：2017-12-15 17:02

  本文关键词：靶向血管生成素-2基因短发夹RNA真核表达载体的构建及内质网应激状态下对人脐静脉内皮细胞凋亡影响的观察

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【摘要】：目的构建人血管生成素-2(Ang-2)短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,观察其在内质网应激(ERS)状态下对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响,探讨Ang-2基因在ERS状态下介导血管内皮细胞凋亡的作用和机制。方法采用DNA重组技术根据人Ang-2mRNA序列设计并合成2条shRNA寡核苷酸片段,构建表达质粒并通过脂质体介导转染HUVECs,对Ang-2基因进行RNA沉默,采用RT-PCR和Western blot分别检测Ang-2在ERS状态下mRNA及蛋白质的表达。结果经双酶切和测序鉴定证实,2个shRNA表达载体均构建成功。与空白对照、阴性对照组相比,Ang2-1-shRNA、Ang2-2-shRNA组HUVECs中Ang-2基因mRNA及蛋白表达水平均降低,其中,Ang2-1-shRNA干扰效果最强。Ang-2mRNA和蛋白的抑制率分别达79.29%、68.21%。沉默Ang-2基因可增加ERS状态下HUVECs细胞活力及抑制其凋亡。结论成功构建靶向Ang-2基因的shRNA真核表达载体,Ang-2基因沉默对ERS状态下HUVECs凋亡有抑制作用。Ang-2基因可抑制血管内皮细胞体外增殖,增强ERS状态下HUVECs凋亡。
【作者单位】： 云南省第一人民医院急诊科;云南省第一人民医院遗传诊断中心;中国科学院昆明动物研究所;昆明医科大学第二附属医院内分泌科;
【基金】：云南省教育厅科学研究基金项目(2014CO12Y)
【分类号】：R363
【正文快照】： 血管生成素-2(Ang-2)与糖尿病血管病变密切相关,可使炎症介质单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达增加[1-3]。关于Ang-2在内质网应激(ERS)介导下对血管内皮细胞损伤及炎症信号通路分子机制方面的研究较少。本研究通过构建靶向人Ang-2基因短发夹RNA(shRNA)表达载体,并转染人脐静脉内

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本文编号：1292715