荧光纳米粒子DNA探针与核酸适配体筛选

发布时间：2017-12-23 11:14

  本文关键词：荧光纳米粒子DNA探针与核酸适配体筛选　出处：《苏州大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：本文第一部分就聚电解质对水溶性量子点CdTe的荧光保护作用以及量子点在核酸检测中的应用作了相关研究。首先，采用静电吸附的方法合成了聚电解质保护的量子点-聚二烯丙基二甲基氯化铵（QDs-PDADMAC）纳米复合物。该纳米复合物呈现出卷曲的、长度不一的“柔性条带”状，条带宽度约3-5nm。在聚电解质PDADMAC的保护下，量子点的荧光量子产率不但没有降低，且有效地防止了表面巯基类配体的脱落，进而比量子点本身具有更明显的时间稳定性以及抗酸、碱、氧化的稳定性，与此同时，还保持了量子点的生物兼容性。 我们利用静电吸附作用将单链核酸探针固定在QDs-PDADMAC纳米复合物条带的表面，制备了探针DNA/QDs-PDADMAC纳米复合物，以此作为能量供体，并以溴化乙锭（EB）标记的dsDNA作为能量受体，建立了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的DNA检测方法。与传统的运用化学键共价结合作用将核酸探针固定在纳米粒表面制备荧光纳米探针的方法相比，此方法更加简单，快速。对FRET体系中探针DNA的浓度、EB浓度，NaCl浓度进行了优化，得到最佳检测条件。在优化条件下对DNA进行浓度检测，方法表现出良好的重现性，信号稳定，得到的定量限为7.7nM，线性范围为7.7-61.6nM，且线性关系良好。本方法简单、灵敏，同时实现了无标记的DNA检测。 现代分子医学需要大量的探针用于识别和表征各种不同的癌细胞。适配体是一种单链DNA/RNA探针，具有与抗体类似的性质，将作为分子探针广泛的应用于在生物医学领域的应用。本文通过基于细胞的指数富集的配基系统进化技术（cell-SELEX），对完整的活细胞进行适配体筛选，对PCR条件、非特异性结合、筛选压力的调节等过程不断优化，在初始随机DNA文库中初步筛选出了对HL-60细胞特异性结合的适配体。HL-60细胞是急性早幼粒细胞白血病细胞，将其作为靶细胞对文库进行筛选，K562细胞为慢性粒细胞白血病细胞，作为对照细胞进行负筛，以增加适配体的特异性。以细胞为基础的SELEX技术筛选适配体简单，，快速且稳健。这种方法可以对复杂的目标样本进行适配体筛选，以产生大量的核酸适配体应用于生物医学和生物技术领域，为分子诊断，治疗和生物标志物的发现铺平了道路。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416

【参考文献】

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本文编号：1323639