细胞内IL-1α调控沙眼衣原体诱导IL-8产生机制研究

发布时间：2017-12-24 01:16

本文关键词：细胞内IL-1α调控沙眼衣原体诱导IL-8产生机制研究　出处：《中南大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

更多相关文章： 沙眼衣原体 IL-1α Hax-1 IL-8

【摘要】：沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)是重要的性传播疾病病原体,Ct感染可引起宫颈炎、输卵管炎和盆腔炎,并导致流产、异位妊娠、不孕等严重后遗症。Ct感染可刺激上皮细胞产生大量炎性细胞因子,参与调节宿主的防御作用。促炎细胞因子IL-1α是机体抵抗感染的重要炎性介质,其可诱导自身(IL-1α)、IL-6和IL-8等炎症因子的产生。目的：探讨细胞内IL-1α在沙眼衣原体早期诱导IL-8产生中的重要作用；Hax-1蛋白与IL-1α相互作用调控沙眼衣原体感染诱导IL-8产生,探讨Ct感染时细胞内IL-1α参与IL-8产生调控的分子机制。方法： 1.ELISA、细胞免疫荧光检测沙眼衣原体感染诱导的炎症因子的产生和定位,复苏已建立的单克隆稳定细胞系,ELISA方法筛选出内源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229急定细胞系。 2.构建pro-IL-1α全长质粒并转染稳定细胞系,ELISA检测外源性IL-1α对沙眼衣原体诱导促炎性细胞因子1L-8产生的影响。 3. Western blot和细胞免疫荧光检测Ct感染后Hax-1在HeLa229细胞中的表达及亚细胞定位细胞,免疫荧光检测Ct感染后Hax-1和IL-1α的共定位； 4.利用siRNA技术下调HeLa229细胞Hax-1的表达,ELISA检测Hax-1沉默对Ct感染后IL-8产生的影响。结果： 1.Ct感染HeLa229细胞后44h可产生炎症细胞因子IL-1α和IL-8,其中IL-1α主要表达于细胞内,IL-8则主要分泌于细胞外。 2.细胞免疫荧光检测到Ct感染后IL-1α入核,同时伴有IL-8的产生。 3.筛选出内源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229稳定细胞株S2C2,沉默效率约79%,Ct感染后44h,与空质粒载体转染细胞相比,S2C2稳定细胞培养上清IL-8的表达显著降低。 4.将pro-IL-1α基因全长质粒转染S2C2稳定细胞株,ELISA检测结果证实S2C2细胞可以表达外源性pro-IL-1α,Ct感染S2C2细胞后外源性IL-1α诱导促炎因子IL-8的表达。 5. Western blot实验证明Ct感染HeLa229细胞48h, Hax-1表达显著增高。 6.免疫荧光实验证明Ct刺激44h时IL-1α、Hax-1有共入核现象,利用siRNA技术沉默Hax-1基因的表达对Ct感染诱导的IL-8产生无影响。结论： 1.Ct感染早期诱导的IL-8的产生依赖于细胞内IL-1α。 2.Ct感染可上调Hax-1的表达,并引起IL-1α和Hax-1蛋白的共入核。 3.Hax-1基因沉默不影响IL-1α诱导IL-8的产生。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392.9

【参考文献】