LMP-1基因慢病毒重组体对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖影响及其表达

发布时间：2017-12-24 10:34

本文关键词：LMP-1基因慢病毒重组体对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖影响及其表达　出处：《山西医科大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：LMP-1重组慢病毒载体体外转染大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），，并检测LMP-1基因对BMSCs增殖能力的影响和表达。方法：选择4周龄SD大鼠六只（不限雌雄），在无菌条件下提取骨髓间充质干细胞并培养至第三代。设立空白对照组、慢病毒载体转染组和重组基因转染组进行转染（空白对照组为未经特殊处理只有第三代骨髓间充质干细胞，慢病毒载体转染组只在未经特殊处理的第三代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-GFP及转染试剂Polybrene，重组基因转染组只在未经特殊处理的第三代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-LMP-1-GFP及转染试剂Polybrene）。转染过48h后，经倒置显微镜来观察细胞荧光表达情况；流式检测基因重组体转染的效率；Western Blot检测基因转染后的表达情况；M T T评估基因重组体转染对骨髓间充质干细胞增殖影响。结果：1.成功的培养了第三代BMSCs，以100的感染复数（MOI）转染，48小时后免疫荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光蛋白表达，经检测转染效率可达67%；2.不同时间点慢病毒载体转染组和重组基因转染组，相对于空白对照组细胞增殖无显著性差异（第一天：F=1.151，P=0.083；第三天：F=1.122，P=0.092；第五天：F=0.732，P=0.121；第七天：F=0,424，P=0.502）。3. Western Blot测得基因重组转染组在72kDa处有特征带，与LMP-1基因融合蛋白（~50KDa+28KDa＝78KDa）基本吻合。结论：证实了经LMP-1基因慢病毒重组体转染大鼠骨髓间充质干细胞对其增殖活力没有影响并可有效表达LMP-1。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

【参考文献】