人骨髓间充质干细胞体外培养及向肝样细胞诱导分化的实验研究

发布时间：2017-12-28 08:26

本文关键词：人骨髓间充质干细胞体外培养及向肝样细胞诱导分化的实验研究　出处：《浙江大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的分离、培养、冻存人骨髓间充质干细胞(hMSCs),并检测人骨髓间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝样细胞。方法利用Ficoll密度梯度离心法与贴壁法相结合,分离、培养、扩增人MSCs,将第3-5代人MSCs用流式细胞仪检测其细胞表面标志;在成骨细胞诱导剂的诱导下向成骨细胞分化,观察细胞形态学变化,并检测碱性磷酸酶(AKP)染色;并在肝细胞生长因子(HGF)及成纤维细胞生长因子(FGF-4)的诱导下定向分化为肝样细胞,观察其形态学变化,进行PAS染色检测糖原,并通过RT-PCR、免疫荧光反应检测肝样细胞的特异标志物ALB、CK18、AFP,鉴定诱导细胞的性质。结果体外分离、培养出的hMSCs呈成纤维样细胞,形态均一,生长状态良好,第3-5代人骨髓间充质干细胞用流式细胞仪检测高表达表面CD29 CD105,不表达CD34。经冻存复苏后,细胞形态无明显差别,均呈典型的梭形;hMSCs经成骨诱导液诱导3周后,行碱性磷酸酶染色阳性。加入HGF、FGF4等细胞因子进行肝细胞诱导后,细胞形态由纺锤形渐转为小圆形,与肝细胞相似;培养诱导的细胞用免疫荧光法及RT-PCR法检测阳性,并糖原染色呈现阳性。结论培养扩增的人MScs具有均一的形态,经流式细胞仪检测,细胞纯度较高;经短期冻存复苏后,仍具较高的活性和增殖能力;在成骨细胞诱导液的诱导下,能向成骨细胞分化;在HGF及FGF-4的作用下,可成功向肝细胞诱导分化,分化的细胞表达肝细胞表面标志物ALB、AFP、CK18,并PAS染色阳性,故hMSCs有可能作为肝组织工程的种子细胞来源。
[Abstract]:Objective to isolate, culture and freeze human bone marrow mesenchymal stem cells (hMSCs) and determine whether human bone marrow mesenchymal stem cells can be induced to differentiate into hepatocyte like cells in vitro.
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R329

【参考文献】