Rho相关激酶ROCK在缺氧致心肌细胞凋亡中的表达及作用机制
本文关键词：Rho相关激酶ROCK在缺氧致心肌细胞凋亡中的表达及作用机制 出处：《南昌大学》2010年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】： 目的 通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察ROCK在不同缺氧时间点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用机制。 方法 1.取健康乳鼠(出生1-3d),利用0.08%胰酶和1.00%II型胶原酶依次消化心肌组织,混悬液经差速贴壁2h后,加入0.1mM5,-Brdu抑制成纤维细胞的生长,以1*106/ml的细胞密度接种于35mm的培养皿中,待心肌细胞生长接近会和状态及呈现同步搏动时开始实验。 2.利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1h、3h、6h、9h,以常规培养的心肌细胞作为对照,检测ROCK-1、ROCK-2的表达。 3.取ROCK-1、ROCK-2表达的高峰时间点, Erk5阻断剂PD98059(终浓度20umol/L)进行缺氧处理后,检测相关指标的变化。 4.用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTS检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、Erk5、p-Erk5、Caspase-3、PI3K、p-PI3K的表达情况。 结果 1.缺氧1h、3h、6h、9h后,心肌细胞凋亡率分别为8.76±1.51%,15.36±2.34%,26.50±3.43%,41.96±4.22%,与对照组(2.6±0.34%)比较均有显著性差异,(均P0.01);存活率分别为93.20±4.12%, 86.14±3.10%,75.53±7.25%,60.21±6.75%,与对照组(97.60±1.12%),比较均有显著性差异,(均P0.05) 2.ROCK-1、ROCK-2缺氧1h即开始升高,3-6小时表达达高峰,9小时开始回落,且均明显高于对照组(P0.05)。 3.Caspase-3在缺氧1小时开始逐渐升高,在随后观察的时相点内持续处于高表达状态,与对照组比较均有显著性差异(均P0.01)。 4.PI3K各时间点表达无明显变化,而p-PI3K在缺氧1h后开始升高,3小时达高峰,6小时开始回落,9h表达基本消失,各时间点比较差别有统计学意义(P0.05)。 5.Erk5缺氧1h即开始升高, 3-6小时表达达高峰,9小时开始回落,且均明显高于对照组(P0.05)。 6.Erk5阻断剂处理后,心肌细胞凋亡率较单纯缺氧6h组明显升高(P0.01),存活率较单纯缺氧6h组明显下降(P0.01);ROCK-1、ROCK-2较单纯缺氧6h组升高(P0.05) 结论 1.ROCK-1、ROCK-2在缺氧后表达逐渐升高,与细胞凋亡的过程相一致,表明ROCK可能参与了缺氧致心肌细胞凋亡的过程。 2.ROCK通过抑制p-PI3K信号途径,促缺氧心肌细胞凋亡。 3.Erk5可能通过抑制ROCK的活性对抗缺氧诱导的心肌细胞凋亡。 4.ROCK可能通过激活Caspase-3引起缺氧心肌细胞凋亡。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R363
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