血红素加氧酶-1在间充质干细胞中的作用研究

发布时间：2017-12-30 08:13

本文关键词：血红素加氧酶-1在间充质干细胞中的作用研究　出处：《兰州大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的:建立人骨髓MSCs培养、扩增、鉴定及外周血T淋巴细胞分离、纯化、鉴定的方法;检测MSCs中HO-1的表达及HO-1对MSCs凋亡的影响;探讨免疫活性细胞和免疫调节因子对间充质干细胞及MSCs中HO-1的影响。HO-1对MSCs免疫抑制效应的影响。方法:密度梯度离心法分离单个核细胞,细胞贴壁法培养并扩增MSCs,倒置相差显微镜下观察MSC细胞形态,流式细胞术检测MSCs表面抗原;尼龙棉柱法从外周血分选出T淋巴细胞,流式细胞术进行鉴定;RT-PCR方法检测MSCs中HO-1mRNA的表达。形态学观察、流式细胞术Annexin V检测细胞凋亡及凋亡细胞DNA含量测定。在IFN-γ及PHA活化的T细胞刺激下,应用RT-PCR方法检测HO-1 mRNA的表达,应用流式细胞术分析细胞凋亡情况。外周血T淋巴细胞用植物血凝素(PHA)刺激后,将其与MSCs共孵育,再加入HO-1特异性抑制剂Znpp-IX,MTT法测定T细胞的增殖并计算增殖转化抑制率。结果:MSCs形态均一,流式细胞术结果显示CD44、CD71高表达。RT-PCR结果显示正常骨髓间充质干细胞有血红素加氧酶-1mRNA的表达,加入HO-1异性抑制剂(Znpp-IX)可明显促进细胞凋亡,同时DNA含量分布图上可见明显的凋亡细胞峰。在IFN-γ及活化的T细胞刺激后HO-1mRNA表达下调。流式细胞术结果表明,IFN-γ及Znpp-IX的加入使间充质干细胞凋亡增加,而两者同时加入使细胞凋亡更加明显。MSCs可使异体T细胞增殖转化受抑,加入Znpp-IX可使MSCs对T淋巴细胞免疫抑制效应减弱。结论:正常骨髓间充质干细胞有HO-1mRNA的表达,HO-1在人骨髓间充质干细胞中具有抗凋亡作用。HO-1在MSCs对T淋巴细胞的免疫抑制效应中可能发挥重要的作用。免疫活性细胞及免疫调节因子使骨髓间充质干细胞中H0-1mRNA表达下调,进而引起细胞凋亡增加。这一实验结果为再生障碍性贫血发病机制的研究提供了新的理论依据。
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【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R329

【引证文献】