OVA免疫耐受因子制备及其免疫活性研究

发布时间：2017-12-30 15:05

本文关键词：OVA免疫耐受因子制备及其免疫活性研究　出处：《西北农林科技大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 免疫耐受现象普遍存在,有生理性和病理性两种表现形式。病理性免疫耐受的发生与外周免疫耐受的形成、维持及打破密切相关。1995年,CD4+CD25+调节性T细胞的发现使外周免疫耐受的研究取得了突破性的进展,大量证据证实CD4+CD25+ T细胞在外周免疫耐受形成和维持中发挥关键性作用。CD4+CD25+ T细胞主要是通过细胞接触以及分泌抑制性细胞因子如TGF-β、IL-10来介导外周免疫耐受的形成与维持。CD4+CD25+ T细胞表面的众多分子被证实参与CD4+CD25+ T细胞抑制功能的调节,但这些分子并不能单独介导外周耐受的形成。是否存在一些分子能够不依赖于细胞、独立地传递免疫耐受信息,从而使受体建立并维持抗原特异性的外周免疫耐受,至今未见报道。深入探讨这类分子的存在、来源等,不仅对阐明其形成的分子机理,丰富免疫耐受理论有着重要的学术意义,研究的结果也对临床免疫耐受相关疾病的治疗有着重要的应用价值。本研究以卵清蛋白(ovalbumin,OVA)和4周龄BALB/c小鼠为材料,采用尾静脉注射、淋巴细胞分离技术、分子筛离心分离方法、淋巴细胞增殖试验、流式细胞术、ELISA、迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)等技术,首先建立OVA外周免疫耐受小鼠模型,对其进行鉴定;分离此模型小鼠脾淋巴细胞,裂解获得不同组分,并鉴定出能够使4周龄正常BALB/c建立OVA外周免疫耐受的组分,命名为OVA免疫耐受因子(OVA immune tolerant factor,OVA ITF);分离OVA外周免疫耐受小鼠的脾淋巴细胞中的各T细胞亚群,按照OVA ITF制备方法制备各亚群的组分,对其转移OVA免疫耐受特性进行研究。获得如下研究结果: 1.成功建立了OVA外周免疫耐受BALB/c小鼠模型,该小鼠OVA特异性T细胞增殖明显受到抑制,CD4+CD25+ T细胞在CD4亚群中的比例显著升高。 2.体外试验显示,免疫耐受小鼠脾淋巴细胞裂解物中小于3ku的组分(OVA ITF)能显著抑制静息态OVA特异性T细胞克隆的增殖,抑制率达到60%;同时,该因子对活化态淋巴细胞增殖的抑制率高达70%。而添加分子量大于5ku和3-5ku间的组分,对淋巴细胞增殖的抑制表现为抗原非特异性。 3.转移OVA免疫耐受小鼠脾淋巴细胞裂解物各组分,只有分子量小于3ku的组分(OVA ITF)能够抗原特异性地抑制受体鼠OVA淋巴细胞克隆的活化;而分子量大于5ku和3-5ku间的组分并无此效应。 4.转移试验中,只有CD4+CD25+T细胞的ITFCD4+CD25+能够显著性抑制OVA特异性DTH反应、抑制OVA特异性T细胞的增殖,而ITFCD4-和ITFCD4+CD25-无此效应。 5.在ITFCD4+CD25+建立的OVA免疫耐受小鼠上,脾淋巴细胞中CD4+CD25+ T细胞在CD4亚群的比例显著升高,同时脾淋巴细胞分泌高水平的TGF-β1。 6.转移ITFCD4+CD25+和CD4+CD25+ T细胞后,受体小鼠脾淋巴细胞中CD4+CD25+ T细胞的比例以及抑制性细胞因子的分泌水平存在差异。研究结果表明,从OVA耐受鼠脾淋巴细胞的CD4+CD25+ T细胞亚群中发现了一种新型的低分子量(3ku)的活性成分,即OVA ITF。它能够在分子水平介导正常BALB/c小鼠建立OVA外周免疫耐受,这种分子只能由OVA外周免疫耐受小鼠的CD4+CD25+T细胞产生。
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【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392.9

【参考文献】