流感病毒感染小鼠肺组织中p53靶基因鉴定

发布时间：2017-12-31 11:10

本文关键词：流感病毒感染小鼠肺组织中p53靶基因鉴定　出处：《中国农业科学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：流感病毒感染能够诱发机体炎症反应,而人类历史上的几次引起流感的流行与暴发的流感病毒均能引起强烈的炎症反应,所引起细胞因子风暴造成多种组织和器官的严重损伤。尤其是肺泡巨噬细胞感染病毒后释放大量的促炎性细胞因子引起的炎性病理损伤,如广泛的肺水肿、肺泡出血组织损伤和坏死,使机体发生多器官的功能衰竭,成为引起流感患者死亡的主要原因。NF-κB作为炎症反应的关键调控分子,能够促进多种促炎性细胞因子的合成与释放,促进炎症反应的发生。NF-κB的激活常被认为是炎症反应起始的标志。肿瘤抑制因子p53在受到多种应激条件的刺激下激活,不仅在DNA损伤修复、细胞周期停滞、细胞凋亡中以及抗病毒感染中发挥作用,还具有抑制炎症反应的效应。许多研究发现,NF-κB与p53这两大信号通路之间在许多生理病理条件下都存在着相互作用,如免疫系统的发育、新陈代谢、细胞凋亡、肿瘤发生以及炎症反应。p53与NF-κB在流感病毒感染中诱发的炎症反应中又有着怎样的相互作用,p53是否在其中扮演者抑制NF-κB的活性而抑制炎症反应的角色。本研究首先用流感病毒感染p53野生型C57BL/6小鼠后,对采取的肺组织进行破碎后进行ChIP-seq测序以发现转录因子p53潜在的靶基因,继而发现p53潜在调控的靶基因中有与炎症反应相关的基因。这表明p53作为转录调控因子,在炎症反应的发生中可能通过转录调控炎症相关分子的基因从而抑制炎症反应。分析ChIP-seq的结果发现,炎症反应通路中的Nfkbiz基因可能为p53潜在的靶基因。 Nfkbiz基因编码的IκB(?)属于IKB家族成员,在NF-κB信号通路中属于非典型成员,能够直接在细胞核内与NF-κB二聚体结合影响NF-κB的转录活性。研究发现,IκB(?)属于IKB家族成员,不仅具有抑制NF-κB的转录活性,同时也是NF-κI某些下游靶基因转录所必须的组成成分,特别是在NF-κB引起的炎症反应第二期反应中细胞因子所对应的基因.IκB(?)有可能在流感病毒感染中扮演着通过调控NF-κB的转录活性进而调节炎症反应的作用。通过荧光实时定量方法,我们发现过表达p53能够抑制Nfkbiz基因的转录水平,在使用LPS刺激Nfkbiz基因表达的同时过表达p53发现抑制效应更加明显,表明p53可能通过抑制Nfkbiz基因的转录从而抑制过度的炎症反应。对Nfkbiz基因序列进行分析后,发现了其中含有可能的p53反应元件。继而通过构建的荧光素酶报告质粒进行荧光素酶双报告试验,发现p53确实能够与Nfkbiz基因中的p53反应元件结合并抑制Nfkbiz基因的转录。ChIP-PCR和ChIP-QPCR的结果也表明p53能够与Nfkbiz基因中+8947～+8969序列进行结合。以上结果表明Nfkbiz是p53的靶基因,能够被p53抑制转录活性。综上所述,本研究证明Nfkbiz是p53负向调控的靶基因,p53能够通过抑制Nfkbiz编码IκB(?),从而降低NF-κB在流感病毒感染中的诱发炎症反应的水平。本研究发现了p53在抑制炎症反应中可能存在的新机制,拓展了p53的细胞分子生物学作用,为研究p53在流感病毒感染过程中能够降低死亡率提供了新的角度。
[Abstract]:NF - 魏B acts as a key regulator of inflammatory response , and can promote the synthesis and release of various cytokines . NF - 魏B can promote the synthesis and release of inflammatory cytokines . NF - 魏B can promote the synthesis and release of inflammatory cytokines . In this study , we first infected p53 wild - type C57BL / 6 mice with influenza virus , and then sequenced the lung tissues to find the potential target gene of transcription factor p53 . It is found that I魏B ( ? ) is a member of IKB family , which can directly bind NF - 魏B dimer to NF - 魏B transcription activity . It is found that I魏B ( ? ) is a member of IKB family , which not only has the transcription activity to inhibit NF - 魏B , but also the gene involved in the transcription of some downstream target genes of NF - 魏B , especially in the second phase of inflammatory response induced by NF - 魏B ( ? ) . I魏B ( ? ) may play a role in regulating the transcriptional activity of NF - 魏B and regulating inflammatory response . It was found that p53 was able to inhibit the transcription of Nfk2gene . The results of ChIP - PCR and ChIP - QPCR also showed that p53 was able to bind to and inhibit the transcription of Nfkbizgene . The results showed that p53 was the target gene of p53 , which was able to inhibit the transcription activity of p53 . In conclusion , the present study proves that Nfkbiza is a target gene for p53 negative regulation , and p53 can inhibit the level of inflammatory response induced by NF - 魏B in influenza virus infection .

【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：S852.65;R373

【共引文献】