RNAi抑制小鼠树突细胞共刺激通路的体外研究

发布时间：2018-01-01 19:04

  本文关键词：RNAi抑制小鼠树突细胞共刺激通路的体外研究　出处：《天津医科大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的:本课题应用RNAi技术修饰小鼠骨髓来源树突细胞(Dendritic Cell,DC),敲减DC表面共刺激分子B7-1(CD80)及B7-2(CD86)表达,探讨RNAi对DC表面抗原CD80、CD86表达的影响以及诱导T淋巴细胞无能的机理。 方法:采用培养基细胞因子选择法体外培养小鼠骨髓来源DC,利用已构建的针对B7-1(CD80)及B7-2(CD86)的shRNA质粒载体pB7shRNA转染DC,流式细胞仪检测转染前后DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表达情况,混合淋巴细胞培养观察pB7shRNA质粒转染DC前后对激活异系T淋巴细胞增殖能力的影响,荧光实时定量PCR测定转染前后CD80、CD86mRNA及混合淋巴细胞培养体系IL-2mRNA表达水平。使用SPSS 15.0软件包进行数据分析。 结果:经过体外培养,每只小鼠可获得1.5-2×10~7个骨髓来源DC,细胞具备典型树突状结构,pB7shRNA质粒载体转染DC后经流式细胞仪检测其表面抗原CD80、CD86表达变化由92.812±1.377%、70.510±1.947%分别下降至31.137±1.702%、40.511±1.555%,与对照质粒转染组相比有显著差异(P＝0.000)。而MHCⅡ、CD11c表达无明显变化。荧光实时定量PCR检测pB7shRNA质粒转染小鼠骨髓源DC后,CD80、CD86mRNA表达水平下降至33.481±2.823%、37.431±2.218%,与对照质粒转染组相比具有显著差异(P＝0.000)。混合淋巴细胞培养显示,pB7shRNA干扰DC对异系T淋巴细胞的刺激指数下降,与对照质粒转染组相比有显著差异(P＝0.000),反应体系中IL-2mRNA表达水平下降至25.675±1.521%,与对照质粒转染组相比具有显著差异(P＝0.000)。 结论:培养基细胞因子选择法可收获大量的骨髓源DC。脂质体介导pB7shRNA质粒载体转染小鼠骨髓DC可高效、特异地抑制B7-1及B7-2分子的表达,使DC激活异系T淋巴细胞能力下降,混合淋巴细胞反应体系中IL-2分泌减少,诱导T细胞无能。
[Abstract]:Objective: to modify mouse bone marrow-derived dendritic cells with RNAi technique. The expression of costimulatory molecules B7-1 (CD80) and B7-2 (CD86) on DC surface was reduced to investigate the effect of RNAi on DC surface antigen (CD80). The effect of CD86 expression and the mechanism of inducing T lymphocyte anergy. Methods: DC derived from mouse bone marrow was cultured in vitro by medium cytokine selection method. The constructed shRNA plasmid pB7shRNA for B7-1mCD80 and B7-2mCD86) was used to transfect DC. Flow cytometry was used to detect the expression of CD80, CD86, MHC 鈪，

本文编号：1365788