预测mmu-miR-30α调控糖皮质激素受体及二者在小鼠足细胞上的表达

发布时间：2018-01-03 00:30

  本文关键词：预测mmu-miR-30α调控糖皮质激素受体及二者在小鼠足细胞上的表达　出处：《大连医科大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： miRNA 糖皮质激素受体 miRanda TargetScan PicTar nephrin Synaptopodin 糖皮质激素受体α mmu-miR-30a 足细胞

【摘要】： 第一部分应用生物信息学预测GR mRNA是mmu-miR-3 Oa的可能靶基因 目的：预测miRNA靶基因是否为糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,GR)mRNA. 方法：使用miRBase(http:／／www.mirbase.org)获得miR-30a基因序列；使用Pubmed(http:／／www.ncbi.nlm.nih.gov)获得基因NR3C1序列；分别使用miRanda. TargetS can. PicTar生物信息学软件对mmu-miR-30a的靶基因进行寻找与预测。 结果：miRanda.TargetS can和PicTar均预测到mmu-mir-30a的靶基因为糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,GR)mRNA. 结论：GR mRNA是mmu-miR-30a的可能靶基因 第二部分小鼠足细胞中GRα及mmu-miR-30a的表达变化 目的：探讨GRα与mmu-miR-30a在小鼠足细胞系MPC5(mouse podocyte clone 5,MPC5)中的表达变化。 方法： 条件永生型小鼠足细胞系MPC5培养：将复苏MPC5细胞于33℃中增殖培养,平均3-4天达90%以上融合传代。换于37℃中培养,10-14天分化为成熟,此时为分化态MPC5；将以上两种细胞分为两组,通过反转录酶—聚合酶链反应(RT-PCR).免疫蛋白印迹(Western-blot).免疫荧光显微镜检测Nephrin.Synaptopodin.GRα在未分化态与分化态MPC5中的表达,观察变化；通过实时荧光定量PCR反应(qRT-PCR)检测mmu-miR-30 a在未分化态与分化态MPC5中的表达,观察变化； 结果： MPC5细胞在33℃有γ-INF的1640培养液中生长,细胞体小而突起,细胞间排列紧密,呈鹅卵石样,部分区域有管腔样结构,足突样结构少见,平均3-4天即达到90%融合,在37℃无γ-INF条件培养下的足细胞较33℃的胞体透明,呈多角形,细胞间相对疏松,管腔样结构增多,生长速度明显减缓,3-4天后细胞即停止增殖,1周后星型细胞样细胞形成,树枝状的足突结构明显,可见细胞间足突互相接触,10-14天分化成熟。RT-PCR.Western-blot.免疫荧光显微镜显示,nephrin在33℃未分化足细胞和37℃分化足细胞中均有表达,37℃分化足细胞中表达显著增加(P0.01);Synaptopodin在33℃未分化足细胞中几乎未见表达；而在37℃分化足细胞中表达明显(P0.01)。GRα在33℃未分化足细胞和37℃分化足细胞中均有表达,37℃分化足细胞中表达显著增加(P0.01)：qRT-PCR检测显示,mmu-miR-30a在33℃未分化足细胞和37℃分化足细胞中均有表达,37℃分化足细胞中表达显著增加(P0.01)。 结论： GRα和mmu-miR-30a在33℃未分化态和37℃分化态MPC5中均有表达,且37℃分化态MPC5表达强。
[Abstract]:The first part uses bioinformatics to predict that gr mRNA is a possible target gene of mmu-miR-3 Oa. Objective: to predict whether miRNA target gene is glucocorticoid receptor GRmRNA. Methods: the miR-30a gene sequence was obtained by using MiRBaseto http: r / r / www.mirbase.org; We use Pubmedan http: / / www.ncbi.nlm.nih.gov. to get the gene NR3C1 sequence; MiRanda. TargetS can. PicTar bioinformatics software was used to search and predict the target genes of mmu-miR-30a. Results both can and PicTar predicted that the target of mmu-mir-30a was the glucocorticoid receptor (Glucocorticoid receptor). Glucocorticoid Receptor. MRNA. Conclusion: the mmu-miR-30a target gene may be the mmu-miR-30a mRNA. The expression of gr 伪 and mmu-miR-30a in mouse podocytes Aim: to investigate the expression of gr 伪 and mmu-miR-30a in mouse podocyte cell line MPC5(mouse podocyte clone 5 (MPC5). Methods: Conditioned immortalized mouse podocyte cell line MPC5 culture: resuscitation MPC5 cells were cultured at 33 鈩，

本文编号：1371602