bFGF、BPE及Forskolin对体外培养嗅鞘细胞增殖的影响及量效关系的探讨

发布时间：2018-01-03 20:31

  本文关键词：bFGF、BPE及Forskolin对体外培养嗅鞘细胞增殖的影响及量效关系的探讨　出处：《福建医科大学》2008年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 第一部分:新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的分离、培养、纯化与生物学特性的研究目的:探讨新生2天大鼠嗅球OECs分离培养和纯化方法,并观察其形态学变化及免疫细胞化学特性。方法:采用原代培养技术,从新生2天大鼠的嗅球分离培养OECs,用差速贴壁+化学药物等方法纯化培养OECs,倒置相差显微镜下观察OECs形态变化特点及生长情况,采用NGFRp75抗体行免疫细胞化学染色,根据NGFR p75免疫细胞化学染色结果统计培养的OECs的纯度。结果:体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三极细胞,其突起细长。未经纯化则成纤维细胞生长迅速7天后明显占据优势,而三种纯化方法中差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法的纯化效率高于其他两种。免疫细胞化学染色显示,培养的新生大鼠嗅球OECs呈现NGFRp75染色阳性。结论:差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法是一种高效率的纯化培养嗅球OECs的方法。 第二部分bFGF、BPE及Forskolin对嗅鞘细胞增殖的影响及量效关系的探讨目的:探讨牛垂体提取物、bFGF及Forskolin对嗅鞘细胞增殖的影响及剂量-效应关系,为OECs移植治疗SCI提供种子细胞。方法:采用原代培养技术,从新生大鼠的嗅球分离培养OECs,并用差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法纯化培养OECs,添加牛垂体提取物、bFGF及Forskolin三种促增殖因子以及因子组合。MTT法检测各组生长因子以及因子组合对嗅鞘细胞生长情况的影响。采用NGFRp75抗体行免疫细胞化学染色,根据NGFRp75免疫细胞化学染色结果统计培养的OECs的纯度,并计算OECs的增值率。结果:OECs原代培养并纯化后添加牛垂体提取物后具有促进OECs增殖的效应,但未见典型的剂量-效应关系;添加bFGF后具有促进OECs增殖的效应,且呈现典型的剂量-效应关系;添加Forskolin后并不具有促进OECs增殖的效应。合理应用不同浓度的bFGF与Forskolin进行联合刺激,能有效促进细胞的增殖。结论:序贯的使用合适浓度的生长因子组合,将是有效促进嗅鞘细胞增殖的合理策略,有助于解决SCI治疗中种子细胞来源不足这一问题。
[Abstract]:Part I: isolation, culture, purification and biological characteristics of olfactory bulb olfactory ensheathing cells from newborn rats objective: to explore the method of isolation, culture and purification of olfactory bulb OECs from neonatal rat olfactory bulb on day 2. The morphological changes and immunocytochemical characteristics were observed. Methods: OECs was isolated from olfactory bulb of 2 days old rats by primary culture technique. OECs were purified and cultured by differential adherent chemical drugs. Morphological changes and growth of OECs were observed under inverted phase contrast microscope. NGFRp75 antibody was used for immunocytochemical staining. According to the results of NGFR p75 immunocytochemical staining, the purity of cultured OECs was analyzed. Results: the OECs of olfactory bulb of neonatal rats was mainly bipolar or tripolar cells. Without purification, fibroblasts grew rapidly for 7 days and occupied the dominant position. The purification efficiency of the three purification methods was higher than that of the other two methods. The immunocytochemical staining showed that the purification efficiency of the three methods was higher than that of the other two methods. OECs of olfactory bulb of cultured neonatal rats was positive for NGFRp75 staining. Conclusion: rapid digestion of differential adherent chemical drug trypsin is a highly efficient method for the purification of olfactory bulb OECs. The second part: the effect of BPE and Forskolin on the proliferation of olfactory ensheathing cells and its dose-response relationship objective: to study the bovine pituitary extract. The effects of bFGF and Forskolin on the proliferation of olfactory ensheathing cells and their dose-response relationship provided seed cells for OECs transplantation and treatment of SCI. Methods: primary culture technique was used. OECs were isolated from olfactory bulb of newborn rats. OECs were purified by rapid digestion of differential adherent chemical drug trypsin, and the bovine pituitary extract was added. The effects of bFGF and Forskolin on the growth of olfactory ensheathing cells were detected by bFGF and Forskolin. NGFRp75 antibody was used to detect the growth of olfactory ensheathing cells. Immunocytochemical staining was performed. According to the results of NGFRp75 immunocytochemical staining, the purity of cultured OECs was calculated. The proliferation rate of OECs was calculated. Results after primary culture and purification of OECs, adding bovine pituitary extract could promote the proliferation of OECs, but there was no typical dose-effect relationship. The addition of bFGF had the effect of promoting the proliferation of OECs, and showed a typical dose-effect relationship. The addition of Forskolin did not promote the proliferation of OECs. Different concentrations of bFGF and Forskolin were used in combination stimulation. Conclusion: it is a reasonable strategy to promote the proliferation of olfactory ensheathing cells with appropriate concentration of growth factors. It is helpful to solve the problem of insufficient source of seed cells in SCI treatment.
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R329

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本文编号：1375487