人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的制备、纯化和复性

发布时间：2018-01-05 13:08

  本文关键词：人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的制备、纯化和复性　出处：《微生物学免疫学进展》2015年03期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的将前期在大肠埃希杆菌中获得表达的A型人呼吸道合胞病毒兰州分离株截短的F1重组蛋白进行纯化和复性,为后期动物免疫制备抗原。方法 37℃诱导重组菌体p ET-42b-F1J/Rossata,诱导完毕后离心收集菌体,高压破碎菌体并收集包涵体后用不同浓度的Triton X-100(细胞裂解液)洗涤包涵体3次。洗涤的包涵体用8 mol/L尿素进行溶解并用镍离子亲和层析方法进行初步纯化,用阳离子交换层析方法对初步纯化蛋白进行最终的纯化。亲和层析纯化蛋白用3种不同的复性液进行了稀释复性。结果 37℃诱导5 000 m L重组菌p ET-42b-F1J/Rossata共收获37 g湿菌体,经过不同浓度Triton X-100洗涤包涵体后纯度可达75%。包涵体用8 mol/L尿素溶解后经镍离子亲和层析纯化纯度约为40%,再用阳离子交换层析介质SP HP进一步纯化样品后纯度可达90%。纯化蛋白以3种不同的复性液都能得到复性,其中复性液3的复性效果相对较好。结论实验中探索了人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的纯化方法及步骤,为后期的蛋白制备及动物免疫奠定了基础。
[Abstract]:Objective to purify and renaturate the truncated F1 recombinant protein of human respiratory syncytial virus type A isolated from Lanzhou strain of Escherichia coli. Methods the recombinant strain pET-42b-F1J / Rossata was induced at 37 鈩，

本文编号：1383239