鸡抗人IgG1卵黄抗体的制备、纯化和分析鉴定

发布时间：2018-01-10 18:21

  本文关键词：鸡抗人IgG1卵黄抗体的制备、纯化和分析鉴定　出处：《天津大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： IgY 卵黄抗体 亲和常数 人IgG1 人胰岛素受体细胞外部分(HIR-ECD)

【摘要】： 抗体通常是从免疫动物血液中获得的,卵黄抗体(IgY)指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。利用免疫鸡将特异性抗体稳定持续地传至卵黄中,制备特异性多克隆抗体,成本低且产量高,有望成为规模制备特异性抗体的有效手段。 本课题主要内容是建立制备和纯化卵黄抗体的方法,并对制备出的卵黄抗体的浓度、纯度、抗原亲和力和抗原特异性进行检测。首先,建立了以水稀释硫酸铵盐析的方法纯化卵黄抗体的纯化方案,该方案不仅具有简单、经济和利于大规模生产的特点,且纯化出的卵黄抗体具有纯度高、活性好等优点。其次,选用卵黄中非特异性抗体浓度极低的无特定病原菌(SPF)鸡,有利于制备特异性卵黄抗体。以人IgG1肌肉和皮下免疫母鸡,血清检测证实免疫方案的成功。在整个34周的免疫周期内,检测了每周血清和卵黄中抗体的浓度,并计算出了卵黄抗体的理论总收率为4.695 g。间接ELISA结果表明,抗人IgG1卵黄抗体对其抗原(人IgG1)亲和常数高于3.0×108 L/M。Western blotting图表明,抗人IgG1卵黄抗体对其抗原(人IgG1)具有非常高的特异性。 按照已经建立卵黄抗体的制备和纯化方案,再次制备出抗HIR-ECD卵黄抗体。血清检测的结果表明血液中产生了特异性抗体。间接ELISA结果表明,抗人HIR-ECD卵黄抗体对其抗原(HIR-ECD)亲和常数为3.4×108 L/M。
[Abstract]:Antibodies are usually obtained from the blood of immunized animals. Egg yolk antibody (IgY) refers to the specific antigen-specific antibodies extracted from the immune eggs. The specific antibodies are transmitted steadily and continuously to the yolk using the immunized chicken. The preparation of specific polyclonal antibodies, with low cost and high yield, is expected to be an effective method for the preparation of specific antibodies on a large scale. The main content of this paper is to establish a method to prepare and purify yolk antibody, and to detect the concentration, purity, antigen affinity and antigen specificity of the yolk antibody. The purification scheme of yolk antibody by water dilution ammonium sulfate saltout method was established. The method is not only simple, economical and convenient for mass production, but also has high purity of purified yolk antibody. Secondly, the selection of egg yolk non-specific antibody concentration is extremely low, no specific pathogen in the preparation of specific egg yolk antibody. Human IgG1 muscle and subcutaneous immunization hens. Serum tests confirmed the success of the immunization program. Weekly serum and yolk antibody concentrations were measured throughout the 34-week cycle. The theoretical total yield of yolk antibody was 4.695 g. The indirect ELISA results showed that the total yield of yolk antibody was 4.695 g. The affinity constant of anti-human IgG1 yolk antibody to its antigen (human IgG1) was higher than 3.0 脳 10 ~ (8) L / M. Western blotting. Anti-human IgG1 yolk antibody is highly specific to its antigen (human IgG 1). The preparation and purification of yolk antibody have been established. The antibody against HIR-ECD yolk was prepared again. The results of serum detection showed that specific antibodies were produced in the blood and indirect ELISA showed that. The affinity constant of anti-human HIR-ECD yolk antibody to its antigen HIR-ECD was 3.4 脳 108L / M.
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

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本文编号：1406337