gx-50对β淀粉样蛋白所诱导小胶质细胞趋化性的影响

发布时间：2018-01-16 13:27

  本文关键词：gx-50对β淀粉样蛋白所诱导小胶质细胞趋化性的影响　出处：《上海交通大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：小胶质细胞是神经胶质细胞的一种，约占大脑中的神经胶质细胞的10～20%。目前的研究认为小胶质细胞是常驻在神经组织中一种免疫细胞，它能清除中枢神经系统中的损坏的神经元，斑块及感染性物质。在阿尔兹海默症（Alzheimer‘s disease,AD）的发展过程中小胶质细胞起着非常重要的作用。脑内老年斑是AD特征性病理表现之一，其主要成分β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）。过度活化的小胶质细胞聚集在Aβ周围持续释放一些炎性因子，引起神经组织炎症反应和神经元变性。因此，通过抑制过多的小胶质细胞向Aβ迁移，可以减少小胶质细胞的过度活化，减轻神经炎症和神经元的变性。gx-50是从花椒中提取的一种活性成分，我们实验室的前期研究发现gx-50可以有效抑制LPS诱导巨噬细胞释放炎性因子,并能够抑制Aβ诱导的大鼠神经元细胞的凋亡。本研究的目的是探讨gx-50对Aβ所诱导的大鼠小胶质细胞趋化反应的影响。 研究方法： 我们采用CCK-8的方法检测不同浓度的gx-50对小胶质细胞活性的影响。采用transwell法检测gx-50对大鼠小胶质细胞向Aβ迁移的影响。用ELISA检测gx-50预处理前后对Aβ诱导小胶质细胞表达趋化因子CCL5和细胞因子TGF-β1的变化情况。使用Real time PCR检测小胶质细胞表达TGF-β1的影响。采用Western blot检测小胶质细胞产生相关信号通路中的标志蛋白p-Smad2，Smad7的水平以及另外一种参与小胶质细胞迁移的蛋白p-GSK-3β的表达水平。 结果： 本研究结果显示：通过CCK-8检测发现，经ANOVA分析0.01，0.1，1，10和100μ M的gx-50并没有显著影响小胶质细胞的活性，，小胶质细胞的活性较未经处理的相比均达到80%以上。Transwell的实验结果显示：gx-50预处理可以减少向Aβ的趋化运动的小胶质细胞的数目。通过对小胶质细胞趋化因子CCL5的表达进行ELISA检测，经ANOVA分析显示，gx-50预处理显著降低了Aβ所诱导的小胶质细胞CCL5的表达量。使用ELISA和Real time PCR的方法分别在蛋白水平和基因水平上检测了小胶质细胞中TGF-β1的含量，经ANOVA分析，gx-50预处理之后，TGF-β1的分泌量在基因水平和蛋白水平与Aβ处理组相比显著升高。Western blot的结果显示：gx-50预处理与单独使用Aβ相比，可以增加p-Smad2和p-GSK-3β的表达，降低Smad7的表达，并且经ANOVA分析发现都达到了显著水平。我们又对小胶质细胞表达细胞因子及信号通路关键分子进行相关回归分析，结果显示小胶质细胞中CCL5的表达与Smad7存在着显著地依存关系，而p-GSK-3β的表达与p-Smad2存在着显著地依存关系。 结论： 综上所述，我们的研究结果证实花椒中的成分gx-50能够减弱小胶质细胞向Aβ的聚集；抑制了小胶质细胞中趋化因子CCL5的表达，减轻了局部的炎症反应；而经过信号通路分析发现，gx-50正是由于活化了TGF-β1-smad2信号通路从而抑制了CCL5的分泌；此外gx-50还可以增加GSK-3β的磷酸化从而降低它的活性从而抑制小胶质细胞向Aβ的聚集。由此可见：gx-50可以通过修复Aβ对TGF-β1-smad2信号通路造成的损伤和抑制GSK-3β活性的从而有效地抑制Aβ诱导的小胶质细胞趋化运动，防止Aβ造成的进一步的神经组织炎症反应，对阿尔兹海默症的发病具有一定的延缓作用。
[Abstract]:Microglia are a type of glial cell, accounting for glial cells in the brain of the 10 ~ 20%. current research that microglia are resident in neural tissues for immune cells, it can eliminate the damage of central nervous system neurons, plaque and infectious substances in Alzheimer's disease (. Alzheimer 's disease, AD) in the development of small and medium-sized glial cells play a very important role. Senile plaques in the brain is one of the pathological characteristics of AD, the main component of amyloid beta (beta -amyloid and A beta). Microglial cells activation gathered in A beta around the sustained release of some inflammatory disease factor, cause nerve inflammation and neuronal degeneration. Therefore, the migration to A beta by inhibiting excessive microglia, can reduce the excessive activation of microglia, alleviate nerve inflammation and neuronal degeneration in.Gx-50 is from the pepper An active ingredient extraction, our previous study found that gx-50 can effectively inhibit the LPS induced release of inflammatory cytokines in macrophages, apoptosis and suppresses A beta induced neuronal cells of rats. The purpose of this study is to investigate the effect of gx-50 on A beta induced rat microglial cells chemotaxis.
Research methods:
We used the method of CCK-8 gx-50 detection of different concentrations on the activation of microglial cells was detected by Transwell. The influence of gx-50 on rat microglia to A beta migration. The expression of chemokine CCL5 and cytokine TGF- beta 1 beta on A induced microglial cells before and after pretreatment of ELISA detection gx-50 the use of Real time PCR. Detection of microglia affect the expression of TGF- beta 1. The detection of Western blot microglia in signal pathway related protein markers p-Smad2, Smad7 and another in microglia migration protein p-GSK-3 beta expression level.
Result锛

本文编号：1433331