火药烟雾致支气管上皮细胞损伤体外研究平台建立及应用

发布时间：2018-01-17 00:23

  本文关键词：火药烟雾致支气管上皮细胞损伤体外研究平台建立及应用　出处：《中国人民解放军军医进修学院》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的：1、设计制作烟雾发生装置及烟雾与细胞反应装置,组建烟雾吸入性损伤细胞分析平台。2、使用烟雾吸入性损伤细胞分析平台,检测民用黑火药烟雾对培养人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的损伤作用,研究其损伤机制。 方法：1、制作烟雾发生装置：使用无线电磁加热器引燃民用黑火药,制作实验烟雾。通过计算火药燃烧率检查火药质量。通过检测实验烟雾对细胞的损伤作用,检查实验烟雾质量。2、制作烟雾与细胞反应装置：装置内温度恒定为37。C,湿度恒定≥90%。3、细胞与烟雾反应影响因素：(1)细胞密度：(2)细胞与烟雾接触方式；(3)烟雾量大小；(4)实验后检测时间：(5)细胞培养液体积；(6)发烟材料燃烧速度：4、使用剂量为0.5g、1g、2g、4g火药制作实验烟雾,与细胞接触10min后,观察其对细胞损伤作用大小；使用相同剂量为2g火药制作实验烟雾,分别与细胞接触5min、10min、15min、20min,观察细胞损伤情况。5、观察烟雾损伤细胞内ROS含量,使用DHE染色,荧光显微镜下观察拍照,IPP软件进行数据处理分析。6、观察烟雾损伤细胞核内DNA损伤情况,使用单细胞凝胶电泳(又称彗星试验)检测火药烟雾造成的细胞核内DNA断裂情况。荧光显微镜下观察拍照,使用casp软件进行数据处理分析。7、用ELISA方法检测烟雾损伤细胞分泌IL-8的情况。 结果：1、火药质量检测变异系数5%。烟雾质量检测变异系数10%。2、火药与细胞反应的影响因素,适宜火药检测指标为(1)细胞密度,12孔板,每孔细胞量为4×104个。(2)细胞与烟雾接触方式,使用滤网。(3)烟雾总体积10L。(4)细胞培养液体积为1ml。(5)检测时间为24h。(6)火药5s内燃尽。3、实验烟雾火药剂量增加及与细胞接触时间的延长,对细胞的损伤加重。4、荧光染色检测单个细胞内ROS含量,随着细胞活性的降低而升高。5、单细胞凝胶电泳检测细胞核内DNA断裂,随着细胞活性降低而加重。6、细胞分泌的IL-8量随着单个细胞损伤的加重而升高。 结论：设计制作的发烟装置能够稳定安全制作实验烟雾,烟雾与细胞反应装置能够实现烟雾致细胞损伤中烟雾浓度、接触时间与损伤效应呈正相关。火药烟雾对支气管上皮细胞有损伤作用,损伤机制与ROS含量增加、细胞核内DNA断裂及IL-8分泌增多相关。
[Abstract]:Objective to design and manufacture smoke generating device and smoke and cell reaction device, to construct smoke inhalation injury cell analysis platform .2and to use smoke inhalation injury cell analysis platform. To investigate the damage mechanism of black powder smoke on cultured human bronchial epithelial cells (BEAS-2B). Method 1, make smoke generator: use wireless electromagnetic heater to ignite black powder for civil use. To make experimental smoke. To check the mass of gunpowder by calculating the burning rate of gunpowder. To check the quality of experimental smoke by detecting the damage of smoke to cells. 2. The device of smoke and cell reaction was made: the temperature of the device was 37.C, the humidity was 鈮，

本文编号：1435498