肺部介入凝胶应用及局部免疫应答的研究

发布时间：2018-02-24 20:52

本文关键词： 长耳兔局部免疫凝胶血常规 T细胞亚群 γ-干扰素病理分析　出处：《河北医科大学》2008年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的:利用长耳兔模型观察已选定的三种单纯凝胶介质的可溶性、渗透性以及吸收和安全情况,对其可否在临床中经支气管镜局部应用做出初步评估。观察含M-母牛分枝杆菌疫苗免疫蛋白凝胶的吸收和安全情况并对注射适宜剂量和不良反应进行分析,着重对含M-母牛分枝杆菌疫苗免疫蛋白凝胶在局部及全身产生的免疫应答效果进行探讨,从而为今后开发可应用于临床的结核病的局部免疫治疗提供依据。方法:将45只日本长耳兔按照随机分组法进行分组,首先分为两大组,凝胶实验组20只,免疫刺激组25只。将凝胶实验组按照随机分组法分为4组,每组5只日本长耳兔。进行下列处置:(1)对照组,不进行任何处理;(2)单纯a-凝胶组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入单纯a-凝胶2.5ml;(3)单纯g-凝胶组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入单纯g-凝胶2.5ml;(4)单纯k-凝胶组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入单纯k-凝胶2.5ml。以上各组每日记录体温变化,观察饮食、活动性、对外界刺激的反应、粪便颜色等一般情况,测量注入凝胶前及处死前体重,检测注入凝胶前及处死前血常规、T细胞亚群,注入凝胶一周后处死解剖,同时观察日本长耳兔内脏特别是肺脏情况,选取凝胶注入部位肺组织进行病理检查。将免疫刺激组按照随机分组法分为5组,每组5只日本长耳兔。进行下列处置:(1)第1组,即对照组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入生理盐水3ml,每周一次,共四周;(2)第2组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入k-凝胶(2.5ml)与以少量注射用水(0.5ml)溶解的M-母牛分枝杆菌疫苗免疫蛋白粉剂(5.63μg)的混合液3ml,每周一次,共四周;(3)第3组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入k-凝胶(2.5ml)与以少量注射用水(0.5ml)溶解的M-母牛分枝杆菌疫苗免疫蛋白粉剂(11.25μg)的混合液3ml,每周一次,共四周;(4)第4组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入k-凝胶(2.5ml)与以少量注射用水(0.5ml)溶解的M-母牛分枝杆菌疫苗免疫蛋白粉剂(22.50μg)的混合液3ml,每周一次,共四周;(5)第5组,经支气管镜于日本长耳兔左肺注入k-凝胶(2.5ml)与以少量注射用水(0.5ml)溶解的M-母牛分枝杆菌疫苗免疫蛋白粉剂(28.13μg)的混合液3ml,每周一次,共四周。其中,第2组、第3组、第4组、第5组属于免疫攻击组。以上各组每日记录体温变化,观察饮食、活动性、对外界刺激的反应、粪便颜色等一般情况,每周测量体重;在每次注入24小时后检测血常规;检测刺激前及刺激后外周血T细胞亚群、外周血中γ-干扰素含量;四周后处死解剖,观察日本长耳兔内脏特别是肺脏情况,以生理盐水灌洗肺泡,收集灌洗液后送免疫实验室检测γ-干扰素,并将部分肺组织研磨,收集研磨后混浆送免疫实验室检测γ-干扰素,选取注入部位肺组织进行病理检查。结果:1凝胶实验组:单纯a-凝胶组、单纯g-凝胶组及单纯k-凝胶组与对照组体温、体重、血常规,外周血T细胞亚群相比差异无统计学意义(P0.05)。单纯a-凝胶组、单纯g-凝胶组及单纯k-凝胶组各组内凝胶注入前与处死解剖前CD3、CD4、CD8百分比相比差异亦无统计学意义(P0.05)。单纯a-凝胶组、单纯g-凝胶组及单纯k-凝胶组与对照组光镜病理观察相比细支气管未发生明显变化,肺泡结构完整,间隔未见增厚及炎细胞浸润。 2免疫刺激组:第2、3、4、5组与第1组体温、体重以及血液中红细胞数、白细胞数、血红蛋白量等血常规指标相比差异无统计学意义(P0.05);第4、5组与第1组外周血CD3、CD4百分比相比差异有统计学意义(P0.05),第4、5组外周血CD3、CD4百分比较第1组增高;第3、4、5组与第1组外周血CD8百分比相比差异有统计学意义(P0.05),第3、4、5组外周血CD8百分比较第1组降低。第4、5组刺激后肺组织研磨混浆中的γ-干扰素含量升高。光镜病理学检查第4、5组与第1组相比细支气管未发生明显变化,肺泡结构基本保持完整,间隔轻度增宽,间隔内可见淋巴细胞浸润。结论:1 a-凝胶、g-凝胶和k-凝胶都具有很好的渗透性、流动性、粘附性和可溶性并且能够与M-母牛分枝杆菌疫苗免疫蛋白充分均匀混合。 2 a-凝胶、g-凝胶和k-凝胶是安全可靠的,并且肺组织易于吸收,皆可作为在临床中经支气管镜局部应用的备选凝胶。 3 k-凝胶可作为溶解介质使免疫蛋白制剂在局部被吸收并引起局部的免疫应答反应而且安全情况良好。 4以健康日本长耳兔为模型局部免疫刺激可以引起全身免疫应答反应。
[Abstract]:Objective : To observe the solubility , permeability and absorption and safety of three kinds of gel media selected by using long - ear rabbit model , and to make a preliminary assessment of whether it can be used in clinic . Methods : 45 Japanese long ear rabbits were divided into two groups according to the random grouping method . Group 2 , Group 3 , Group 4 , Group 5 belong to the group of immune attack . The group 2 , Group 3 , Group 4 , Group 5 belong to the group of immune attack . The group 2 , Group 3 , Group 4 , Group 5 belong to the immune attack group . Results : Compared with control group , there was no significant difference between group A - gel group , simple g - gel group and simple k - gel group ( P0.05 ) . Compared with control group , there was no significant difference in the percentage of CD3 , CD4 and CD8 before and after injection of simple a - gel group , simple g - gel group and simple k - gel group . There was no significant difference between groups 2 , 3 , 4 , 5 and group 1 . The percentages of CD3 and CD4 in peripheral blood of group 4 and 5 were significantly higher than those in Group 1 ( P0.05 ) . The percentages of CD3 and CD4 in peripheral blood of group 4 and 5 were higher than those in Group 1 . Conclusion : 1 a - gel , g - gel and k - gel have good permeability , fluidity , adhesion and solubility , and can be mixed well with M - cow mycobacterial vaccine immune protein . 2 a - gel , g - gel , and k - gel are safe and reliable , and lung tissue is readily absorbed as an alternative gel for topical application in clinic . The 3 - k - gel can be used as a dissolution medium to allow the immune protein formulation to be locally absorbed and cause localized immune response , and the safety condition is good . 4 . The local immune stimulation of healthy Japanese long ear rabbits can cause systemic immune response .

【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

【参考文献】