环境化学物质VCD致卵巢早衰动物模型的构建

发布时间：2018-03-13 07:16

  本文选题：卵巢早衰　切入点：动物模型　出处：《山东大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 研究背景 卵巢早衰病因和机理比较复杂,尚没有合理有效的治疗方法。卵巢早衰可严重影响患者的生活质量,而且直接促进某些严重疾病的发生,如卵巢早衰导致年轻妇女不育、提前闭经等一系列内分泌变化,增加心血管疾病的发生率,导致骨质疏松。因此,进一步探讨卵巢早衰(POF)的病因学及寻求有效的治疗方法是解决这个疾病的关键。鉴于POF人体研究的可行性低,建立与人类相似的生殖内分泌和组织学变化的POF模型对于POF发病机制的研究和进一步治疗具有重要价值。 女性生来具有有限的原始卵泡池,生后不可再生。绝大多数原始卵泡将走向闭锁,只有不到1%的卵泡发育成熟并排卵。因此,暴露于原始卵泡毒性的化学物质中的女性生育能力就会受到损害,也可能使女性提早绝经。有研究发现环境物质能破坏卵泡中的卵母细胞进而影响卵巢功能,由于人们接触到越来越多的环境化学物质制品,职业暴露可能增加不孕及卵巢早衰的危险。因此环境物质对卵巢毒性的影响越来越受到关注。 VCD(4-vinylcyclohexene diepoxide)是VCH(4-vinylcyclohexene)的主要代谢产物之一,VCH产生于生产橡胶轮胎、阻燃剂、杀虫剂、可塑剂及抗氧化剂等的过程中,研究发现VCH和VCD能选择性破坏雌鼠和短尾猴卵巢内的原始卵泡和初级卵泡,最终引起雌鼠卵巢早衰,而VCD是VCH卵巢毒性的主要活性形式。因此本研究选择VCD构建POF动物模型,通过观察阴道涂片及不同时间段卵巢组织学变化等判断造模效果,旨在观察卵巢逐步衰竭的过程及探讨该动物模型的成功率,和是否是能模拟生理性的卵巢早衰,为卵巢早衰的病因和治疗提供研究方法和实验依据。 研究目的 1.建立环境化学物质VCD致卵巢早衰小鼠模型。 2.观察VCD作用下小鼠卵巢功能变化的相关指标。 3.观察VCD用药后卵巢功能逐步衰竭的过程。 4.提高人们对环境因素的关注。 研究内容和方法 1.研究对象： 雌性昆明小鼠60只,28天龄,体重90±10 g,购自山东大学动物实验中心,温度控制在22±2℃,相对湿度为50%-60%,自由饮食,每天光照时间为12h。 2.研究方法： 2.1实验方案 将60只小鼠随机分为VCD组、佐剂对照组、正常对照组和去势组四组,VCD组和芝麻油组分别每天腹腔注射同等量的VCD和芝麻油5ml／kg,注药2周后每天观察小鼠阴道涂片,观察小鼠动情周期变化。分别于注药后不同时间取卵巢和子宫组织做组织学检查,同时计数各级卵泡数目,观察小鼠子宫和卵巢的形态及组织学变化。 2.2分组与用药 将实验动物随机分为4组： A组：即VCD用药组20只,每天腹腔注射VCD160mg／kg,即5ml／kgVCD溶液(VCD溶于芝麻油中),连续注射15天； B组：佐剂对照组即芝麻油组16只,每天注射同等剂量芝麻油5ml／kg,连续注射15 天； C组：即正常对照组20只,不做任何处理； D组：即去势组4只,于注药第1天行双侧卵巢切除术。 2.3实验观察指标 ①小鼠一般状态观察：观察处理后各组小鼠的活动、饮食及体重变化等情况。 ②小鼠动情周期的观察：每天取小鼠阴道分泌物涂片并HE染色,观察小鼠动情周期变化情况。 ③小鼠卵巢和子宫组织学变化：分别取不同时间段(d18,d37,d80和d120天)小鼠卵巢和子宫组织做病理切片并HE染色,切片厚度为5μm,每隔20μm取一张切片,光镜下观察小鼠卵巢和子宫的组织学改变。 ④不同时间段卵泡计数：于注药后d18,d37,d80和d120天分别卵泡计数,为避免重复计数卵泡,原始卵泡和初级卵泡以卵母细胞核作为标记物计数,次级卵泡和窦卵泡以卵母细胞核仁为标记物计数。每只取20张切片分别计数各级卵泡数目。 结果 1.动情周期变化：注药d60天VCD组动情周期不规则数占80%,d80天全部紊乱。芝麻油组和正常对照组动情周期变化较稳定,去势组小鼠均处于动情间期,无动情周期变化 2.卵泡计数和卵巢组织学变化：注药d18天VCD组原始卵泡消失,初级卵泡较少见,次级卵泡和窦卵泡未见明显减少,注药d37天VCD组初级卵泡偶见或消失,次级卵泡和窦卵泡总数减少至正常对照组的10.08%(8.33／82.67),其卵泡总数为正常对照组3.96% (11／278),d80天VCD组各阶段生长卵泡数严重减少(P0.01)；d120天VCD组5只小鼠卵巢体积均明显减小(5／5),镜下见卵巢萎缩明显、皮质增厚、结构紊乱,各级卵泡消失或偶见,正常对照组和芝麻油组可见各级发育中的卵泡. 3.子宫形态及组织学变化：注药d120天VCD组子宫体积萎缩、内膜变薄、腺腔小,类似于去势组子宫变化。正常对照组和芝麻油组子宫内膜较厚,固有层腺体丰富. 结论 1.用职业性环境化学物质VCD能成功建立卵巢早衰动物模型,实验方法简便,建模成功率高。 2.本研究结果显示VCD能选择性破坏原始卵泡和初级卵泡,最终引起次级卵泡及窦卵泡的减少至消失,提示VCD作用于卵巢的靶细胞可能是原始卵泡和初级卵泡,卵巢组织学观察并未见炎型反应及坏死结构,其致卵巢早衰的机制可能是通过凋亡途径。 3.用职业性环境化学物质VCD所致的卵巢早衰过程类似于女性生理性的卵巢早衰过程,这对于卵巢早衰的临床研究和治疗提供一定的帮助。 4.保护女性远离卵巢毒性物质,对女性生殖健康至关重要。
[Abstract]:Research background
The etiology and mechanism of premature ovarian failure is more complex, there is no effective methods for the treatment of premature ovarian failure. It can seriously affect the quality of life of patients, but also directly promote some serious diseases, such as premature ovarian failure in young female infertility, amenorrhea in advance of a series of endocrine changes, increase the incidence of cardiovascular disease, osteoporosis. Therefore, to further explore the etiology of premature ovarian failure (POF) and seeking effective treatment is the key to solve this disease. In view of the feasibility study of the POF body is low, on the establishment of POF model changes similar to human's reproductive internal secretion and tissue in the pathogenesis of POF and further treatment has important value.
濂虫，

本文编号：1605330