抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

发布时间：2018-03-19 04:19

  本文选题：-硝基酪氨酸　切入点：单克隆抗体　出处：《免疫学杂志》2015年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的制备抗3-硝基酪氨酸(3-NT)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法用化学合成方法将3-NT与OVA用戊二醛偶联合成的人工抗原3硝基酪氨酸-戊二醛-鸡卵白蛋白(3NT-G-OVA)作为免疫原,皮下注射免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,扩大培养并对抗体进行免疫学鉴定与分析。结果获得1株稳定分泌抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗亚型为Ig G2a;纯化后的抗体效价为1∶(6.14×106);单抗亲和力常数为7.81×107(L·mol-1);Western blot检测证明该单抗与含有3-硝基酪氨酸的蛋白能特异地结合。结论制备了1株具有较高免疫学活性和特异性的抗3-NT单克隆抗体,并可用于Western blot检测病人样本中的蛋白硝基化水平。
[Abstract]:Objective to prepare monoclonal antibody against 3-nitrotyrosine tyrosine and identify its immunological properties. Methods 3NT-G-OVA, an artificial antigen synthesized by coupling 3-NT with OVA with glutaraldehyde, was used as immunogen. Balb/c mice were immunized subcutaneously. Spleen cells of immunized mice were fused with SP2/0 myeloma cells. Positive hybridoma cell lines were screened by indirect ELISA method. Results A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody against 3-nitrotyrosine was obtained. The monoclonal antibody secreted was Ig G2a, the titer of purified antibody was 1: 10 4 脳 10 6, and the affinity constant of the monoclonal antibody was 7.81 脳 10 7 L 路mol -1 blot. It was proved that the monoclonal antibody could specifically bind to the protein containing 3-nitrotyrosine. Conclusion A strain with high immunogenicity was prepared. Bioactive and specific monoclonal antibodies against 3-NT, It can be used to detect the nitration level of protein in patient samples by Western blot.
【作者单位】： 重庆理工大学药学与生物工程学院;重庆市垫江县中医院检验科;北欧生物科技(北京)有限公司;
【基金】：国家自然科学基金(30571714,60873103) 重庆市科委自然基金(2008BB5331,2009BB7231) 重庆市卫生局科研项目(2012-2-383)
【分类号】：R392.11

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1632804