甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）分子进化机制研究

发布时间：2018-03-21 11:57

  本文选题：MRSA　切入点：克隆进化　出处：《中国协和医科大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的研究MRSA进化的基本规律,勾勒出MRSA进化的概略图。通过病例对照研究获得我国hVISA感染的相关临床信息并对危险因素和病死率相关性进行分析。初步研究hVISA耐药机制相关基因。 方法收集北京协和医院1994-2008年466株非重复金黄色葡萄球菌(包括302株MRSA和164株MSSA),进行SCCmec、spa、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析(MLST)分型。采用BHIT5(含替考拉宁5μg/ml的脑心浸液琼脂平皿)、BHIV6(含万古霉素6μg/ml的脑心浸液琼脂平皿)和MET法筛选MRSA中的hVISA并使用改良PAP-AUC(菌群谱型分析)法进行确认。通过病例调查表(CRF)的形式收集hVISA组和对照组的临床相关信息,使用student t检验、Mann-Whitney检验、χ2检验以及fisher精确检验等统计方法对病例资料进行回顾性分析。采用实时荧光定量PCR研究hVISA耐药相关基因agr的转录水平。 结果302株MRSA共发现12个spa型和9个STs型。在1994-2000年之间,MRSA最流行的克隆是ST239-MRSA-Ⅲ-spa t037;自从2000年开始,ST239-MRSA-Ⅲ-spa t030很快取代以前的优势克隆t037,并且成为最流行的克隆。在2002年,另一个MRSA克隆ST5-MRSA-Ⅱ-spa t002出现,并且一直维持一个很低的流行水平。164株MSSA共发现62个spa型和40个STs型。在MSSA中,ST398是最常见的STs型,其他依次为ST59、ST7、ST15和ST1。一些MSSA基因型(包括ST398、ST1、ST121和ST59与一些流行的CA-MRSA基因型相同。MLST eBURST分析显示ST5. ST59和ST965克隆共同存在于MRSA和MSSA中,这提示MRSA可能通过MSSA获得SCCmec进化而来。依照临床病例资料,2株pvl阳性菌株ST59-MRSA-Ⅳ为CA-MRSA。hVISA组与VSSA组在万古霉素MIC水平上存在显著差异(80%versus 24.9%,P0.001),hVISA组万古霉素MIC值高于VSSA组。回顾性病例对照研究发现,hVISA组和VSSA组在临床治疗、结局及感染相关病死率方面无差异。尽管如此,hVISA组与VSSA组住院天数存在差异(P=0.025),hVISA感染的患者住院时间延长。与相应的VSSA相比,10株hVISA中有9株RNAⅢ的转录水平下调,其中下调最大的达1000倍。 结论新出现的MRSA克隆ST239-MRSA-Ⅲ-spa t030很快取代了以前的旧克隆ST239-MRSA-Ⅲ-spa t037,这说明这15年间北京协和医院MRSA流行克隆发生了一个快速的变迁。hVISA组万古霉素MIC水平显著高于VSSA组,但多种新型抗菌药物对其具有良好活性。hVISA感染与万古霉素治疗失败无相关性,hVISA感染的患者住院时间延长,对hVISA临床意义的研究可能需要进行大样本的前瞻性队列研究。agr转录水平的下调与万古霉素的敏感性下降相关,但是关于hVISA具体的耐药机制还需要更进一步深入的研究。
[Abstract]:Objective to study the basic law of MRSA evolution, A general picture of the evolution of MRSA was outlined. The clinical information of hVISA infection in China was obtained by case-control study and the correlation between risk factors and mortality was analyzed. The genes related to the mechanism of hVISA drug resistance were preliminarily studied. Methods from 1994 to 2008, 466 strains of non-repetitive Staphylococcus aureus (including 302 strains of MRSA and 164 strains of MSSA) were collected for SCCmecspax, pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and multilocus sequence analysis (MLST) typing. BHIT5 (including teicoplanin 5 渭 g / ml) was used to classify the brain and heart. BHIV6 (brain heart extract containing vancomycin 6 渭 g / ml) and MET method were used to screen hVISA in MRSA and to confirm it by modified PAP-AUC method. HVISA group and control group were collected in the form of case questionnaire. Clinical information, Student t test, Mann-Whitney test, 蠂 2 test and fisher accurate test were used to analyze the case data retrospectively. Real-time fluorescence quantitative PCR was used to study the transcription level of hVISA drug-resistance-related gene agr. Results A total of 12 spa types and 9 STs types were found in 302strains of MRSA. The most popular clone of ST239-MRSA- 鈪，

本文编号：1643753